F-aktin mérése egyedi sejtekben áramlási és képalkotó citometriával

Dátum
2012-11-23T15:02:38Z
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

Az aktin fontos szerepet játszik az eukarióta sejtek működésében. Részt vesz a citoplazmatikus sejtváz mikrofilamentális hálózatának a felépítésében, és ezen keresztül többek között a sejtek alakjának a meghatározásában, a sejten belüli mozgások kivitelezésében, a teljes sejtek, sőt az izomkötegek mozgatásában, és kiemelt szerepe van a sejtmembrán funkcióinak a működtetésében is. Részt vesz például a membrán kitüremkedéseknek, a filopódiumoknak és lamellipódiumoknak a létrehozásában, az endo- és exocitótikus folyamatokban és strukturálisan is megerősíti a sejtmembránt. A sejtkortex kialakításával és direkt membránkapcsolatok létesítésével az aktin citoszkeleton részt vesz az eukarióta sejtek plazmamembránjának stabilizálásában is. Munkánk során az volt a célunk, hogy olyan citometriás mérést dolgozzunk ki, amellyel mérni tudjuk az aktin citoszkeletont befolyásoló szerek rövidtávú, akut hatásait. A mérések beállításához a citokalazin D hatását vizsgáltuk elsősorban, mely ismert aktin depolimerizációt okozó szer. A citokalazin D megfelelő működésének a megítélésére először a sejtek életképességére kifejtett hatását vizsgáltuk kolorimetriás tetrazólium teszttel (MTT). Ezután áramlási citometria segítségével fluoreszcenciásan jelzett falloidin felhasználásával meghatároztuk a citokalazin D-nek a tenyésztett sejtekre kifejtett rövidtávú hatását. Az itt kapott eredményeket mikroszkópia és képalkotó citometria segítségével erősítettük meg. Méréseink során megállapítottuk, hogy a citokalazin D-nek a HeLa és JY sejtekre kifejtett akut hatása alapján, nem az általunk várt sejt össz aktin tartalom mérés ad megbízható és gyors eredményt a szer működésének a megítélésére, hanem a sejtek méretbeli változásának a nyomon követése az áramlási citometriás előre irányuló fényszórás (FSC) paraméter, illetve a képalkotó citometriás módszerrel mért sejt terület értékek alapján.

Leírás
Kulcsszavak
aktin, citokalazin D
Forrás