A miozin foszfatáz lokalizációja és szabályozása nem-izom sejtekben

Dátum
2007-05-15T12:59:03Z
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

A miozin foszfatáz (MP) holoenzim protein foszfatáz-1 (PP1) katalitikus alegységből (PP1c és 130/133 kDa miozin kötő (célra irányító) alegységből (MYPT1) áll. Elsődleges funkciója a miozin-II 20 kDa könnyűláncának (MLC20) defoszforilációja, és ezzel fontos szerepet játszik a simaizom és nem-izom sejtek kontrakciójának és motilitásának szabályozásában. A MP aktivitását a MYPT1 Thr695 és Thr850 oldalláncának Rho-asszociált kináz (ROK) általi foszforilációja szabályozza. A MP a miozinon kívül más fehérjéket is defoszforilál, azonban lokalizációja, valamint a kontraktilitáson kívül más sejtfolyamatokban játszott szabályozó szerepe nem-izom sejtekben és szövetekben kevésbé ismert. Eredményeink szerint a MP és a MYPT1 jelen van agyszövetben és humán hepatokarcinóma sejtekben (HepG2) is. Az MP aktivitása és a MYPT1 mennyisége hasonló régió- és szubcelluláris megoszlást mutat, amely a MYPT1 célra irányító funkciójára utal az idegsejtekben és a HepG2 sejtekben is. A MP és a MYPT1 az agyban valamennyi agyrégióban kimutatható, de koncentrálódása specifikus magcsoportopkhoz az idegsejtekre specifikus fiziológiai funkciókat sejtet. A MP-t kimutattuk az agykéregből izolált szinaptoszómák preszinaptikus frakciójában, és igazoltuk kölcsönhatását a szinaptofizin fehérjével, ROK-kal és a PP1cδ izoformával. A MP tehát szerepet játszhat a szinapszisok vezikuláris transzportjában és a neurotranszmitterek kibocsátásában a szinaptikus résbe. A HepG2 sejtek kezelése foszfatázinhibitor okadainsavval (OA) a protein foszfatáz 2A (PP2A) enzim gátlását eredményezve szabályozza az MLC20 és a MYPT1 foszforilációs szintjét. Az OA a MYPT1 citoplazmából plazmamembránba történő transzlokálcióját okozta és növelte a MYPT1 foszforilációját a gátló Thr695 oldalláncon. Ezen hatásokat a ROK inhibitor Y27632 kevésbé befolyásolta. Az OA növelte a MYPT1 foszforilációját a Thr850 oldalláncon (MYPT1pThr850), amelyet Y27632 nagymértékben gátolt. A MYPT1pThr850 a sejtmagban és a perinukleáris régióban volt jelen. Az OA kezelés a MLC20 Ser19 foszforilációját és a foszforilált miozin-II-nek a sejtek centrális részén való koncentrálódását indukálta, amelyet az Y27632 részlegesen gátolt. HepG2 sejtekben az OA hatására stresszrostok képződtek és csökkent a sejtek migrációs készsége, de e változások a ROK inhibitor jelenlétében nem figyelhetők meg. Következtetésünk az, hogy az OA PP2A- és részben ROK-függő módon a MYPT1 szelektív foszforilációját és transzlokációját indukálja, ami a miozin defoszforilációjának gátlásával párosul. Ezek a hatások a miozin fenntartott foszforilációját eredményezve szabályozzák a sejtek motilis sajátságait.

Leírás
Angol nyelvű összefoglalással
Kulcsszavak
Forrás