Enzimreakciók vizsgálata biológiai mátrix jelenlétében

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

Munkám során enzimeket vizsgáltam biológiai mátrix jelenlétében (természetes környezetükben) annak érdekében, hogy olyan mérési módszereket fejlesszek, amelyekkel elkerülhető a rendkívül időigényes és költséges izolálás, és az adott enzim működése akár más enzimek jelenlétében is jól nyomon követhető. Méréseim során három enzimet, sertés pankreáeszból és burgonyabogár beléből kivont α-amilázt, nyúlszemből származó aldóz reduktázt és nyúlizomból kivont glikogén foszforilázt vizsgáltam spektrofotometria, nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) és izotermális titrálásos kalorimetria (ITC) segítségével. Munkám során arra kerestem a választ, hogy az egyes szövetekből kivont enzimeket milyen körülmények között kell tárolni annak érdekében, hogy megőrizzék aktivitásukat. Továbbá olyan mérési módszereket fejlesztettem, melyekkel az említett enzimek által katalizált reakciók jól nyomon követhetők. Az α-amiláz enzimmel kapcsolatos spektrofotometriás méréseim során arra a következtetésre jutottam, hogy a mérésekhez felhasznált Gal-G2-CNP szubsztrát szelektív α-amiláz meghatározást tesz lehetővé. Az aldóz reduktázzal kapcsolatos spektrofotometriás méréseim során azt tapasztaltam, hogy a nyúlszemből készült, aldóz reduktáz aktivitás mérésre szánt kivonat aktivitása glükuronsav szubsztráton mérhető, de glükóz jelenlétében rendellenes viselkedést mutat. A glikogén foszforiláz enzimmel végzett vizsgálataim során HPLC-s mérések segítségével igazoltam, hogy a nyúlizomból készült kivonat GFb mellett enzimatikusan aktív GFa-t is tartalmaz. A nyúlizomporból származó glikogén foszforiláz enzim reakcióinak kinetikai vizsgálatához izotermális titrálási kalorimetriát (ITC) alkalmaztam.

Leírás
Kulcsszavak
enzim, amiláz, aldóz reduktáz, glikogén foszforiláz
Forrás