Kalló, GergőGuba, Andrea2025-10-032025-10-032025https://hdl.handle.net/2437/397762A kutatás során célunk humán testfolyadék minták elemzésére alkalmas metabolomikai módszerek fejlesztése volt, melyek hiánypótlóak a klinikai kutatásokban. Az aminosavak és biogén aminok elemzése fontos információval szolgálhat az orvostudományokban, ám legjobb tudomásunk szerint jelenleg nincs olyan validált analitikai módszer amely alkalmas ezen molekulák egyidejű vizsgálatára. Ezért kifejlesztettünk és az FDA irányelvek szerint validáltunk egy UHPLC-MS módszert, ami alkalmas 33 aminosav és biogén amin egyidejű gyors analízisére komplex biológiai mintákból. A validált módszert szérum- és könnymintákon teszteltük, bizonyítva a módszer megbízhatóságát és alkalmazhatóságát klinikai szempontból releváns mintákon. Az egészséges önkéntesektől gyűjtött minták analíziséből származó eredmények összhangban állnak a tudományos irodalomban fellelhető adatokkal. Az Azatioprin metabolitok vizsgálata fontos szereppel bír a terápiás gyógyszerszint beállításában, mely a kezelés hatékonysága szempontjából kiemelten fontos. Munkánk során kifejlesztettünk és az Európai Gyógyszerügynökség kritériumai szerint validáltunk egy UHPLC-MS módszert két Azatioprin metabolit, a 6-tioguanin és a 6-metilmerkaptopurin analízisére. A validált módszert azatioprin kezelés alatt álló autoimmun hepatitiszben szenvedő betegek vérmintáin teszteltük. A kifejlesztett módszer alkalmasnak bizonyult a két metabolit koncentrációjának meghatározására, emellett az általunk meghatározott koncentráció értékek összhangban voltak a gyógyszer dózisával is. Az eredmények alapján a kifejlesztett módszer alkalmas a vizsgált molekulák mennyiségi meghatározására klinikai mintákban, és segíthet a gyógyszer dózisának optimalizálásában a kezelés során.In this research, our aim was to develop metabolomic methods for the analysis of human body fluid samples, which are a niche in clinical research. The analysis of amino acids and biogenic amines can provide important information in the medical sciences, but to the best of our knowledge, there is currently no validated analytical method that is suitable for the simultaneous analysis of these molecules. Therefore, we have developed and validated a UHPLC-MS method according to FDA guidelines for the rapid simultaneous analysis of 33 amino acids and biogenic amines from complex biological samples. The validated method was tested on serum and tear samples, demonstrating the reliability and applicability of the method on clinically relevant samples. The results obtained from the analysis of samples collected from healthy volunteers are in agreement with data available in the scientific literature. The study of Azathioprine metabolites has an important role in the therapeutic drug level setting, which is of paramount importance for treatment efficacy. In our work, we developed and validated a UHPLC-MS method for the analysis of two Azathioprine metabolites, 6-thioguanine and 6-methylmercaptopurine, according to the criteria of the European Medicines Agency. The validated method was tested on blood samples from patients with autoimmune hepatitis under azathioprine treatment. The method developed proved to be suitable for the determination of the concentrations of the two metabolites and the concentration values we determined were also consistent with the dose of the drug. The results suggest that the developed method is suitable for the quantification of the tested molecules in clinical samples and may help to optimize the drug dose during treatment.83huszármazékképzés derivatization; folyadékkromatográfia liquidcromatograpy (LC); tömegspektrometria mass spectrometry (MS); testfolyadék body fluid; szérum serum; könny tears; módszerfejlesztés method development; validáció validation azatioprin azathioprine; 6-tioguanin 6-thioguanine; 6-metil-merkapto-purin 6-methyl-mercaptopurinePhD, doktori értekezésElméleti orvostudományokOrvostudományok