Papp, MáriaFöldi, Ildikó2017-06-092017-06-092017http://hdl.handle.net/2437/241655BEVEZETÉS A veleszületett immunrendszert alkotó celluláris és humorális alkotóelemek működésének megváltozása jelentős szerepet tölt be a különféle, nagy betegpopulációt érintő krónikus gyulladással járó gasztroenterológiai kórképek patogenezisében, mint például a gyulladásos bélbetegségek (IBD) vagy a coeliakia. Elégtelen működésük számos betegcsoportban, így májcirrhosisban is gyakoribb, súlyosabb infekciók kialakulásához vezethet. A coeliakiához vezető korai pathológiás történések magukba foglalják a veleszületett immunrendszer aktivációját is, mely elsősorban az epitheliumban zajlik. Emellett a coeliakia tipikus jellegzetessége a különböző antitestek jelenléte, habár ezek termelődésének hátterében álló mehanizmusok és a betegség pathogenezisében betöltött tényleges szerepük egyelőre nem teljesen tisztázott. A szöveti transzglutamináz 2 (TG2) a fő autoantigénje az anti-endomysialis antitesteknek (EMA) és az anti-TG2/EMA vizsgálata gyakran használt módszer a CD szűrésében és diagnosztikájában. A különféle baktériumok sejtfalának szénhidrát epitópjai ellen termelődő antitestek a szövődményes Crohn-betegség markerei. Az anti-Saccharomyces cerevisiae antitest (ASCA) gyakoribb megjelenését coeliakiában is leírták. Ugyanakkor az IBD-ben észlelt egyéb antimikrobiális antitestek (ALCA, AMCA, ACCA, anti-OMP) előfordulásának gyakorisága illetve klinikai jelentősége coeliakiában nem tisztázott. A májcirrhosisos betegek különösen fogékonyak a bakteriális fertőzések kialakulására, a cirrhosis asszociált immundeficiencia (CAID) szindróma jelenléte miatt, ennek azonban még nem minden komponense ismert. A komplement rendszer lektin útvonalának molekulái a veleszületett immunrendszerhez tartoznak, a májban képződnek és központi szerepet töltenek be a mikrobákkal szembeni védekezésben. A fikolinok (FCN) szolubilis mintázatfelismerő receptorként működnek, míg a mannóz-kötő lektin szerin proteázok (MASP) effektor molekulák. A funkcionális fehérjék alacsony szintje növeli a különféle fertőzés kialakulásának kockázatát, elsősorban immunszupresszióval járó kórképek esetén. A májcirrhosishoz kapcsolódó bakteriális fertőzésekben betöltött szerepük kevéssé ismert. CÉLKITŰZÉSEK Vizsgálataink során célul tűztük ki, hogy felnőtt coeliakias betegekben meghatározzuk a különféle glikán típusú antimikrobiális antitestek előfordulási gyakoriságát, a betegség klinikai fenotípusával való kapcsolatát, valamint azok jelenlétének lehetséges összefüggését a glutén expozícióval. Prospektíven követett, nagy esetszámú májcirrhosisos betegcsoportban célul tűztük ki továbbá annak vizsgálatát, hogy a lektin útvonal egyes molekuláinak (FCN-2, FCN-3 és MASP-2) szérumszintje hogyan változik az egészséges populációhoz képest és mutat-e összefüggést a betegségspecifikus szövődmények jelenlétével. Ötéves utánkövetéses klinikai vizsgálatban elemeztük a fikolinok és a MASP-2 molekulák szérumszintjének összefüggését a klinikailag jelentős bakterális infekciók kialakulásával és a halálozással. MÓDSZEREK A coeliakiás betegcsoportban az antimikrobiális antitestek illetve a májcirrhosisos betegekben a lektin útvonal molekuláinak (FCN-2, FCN-3, MASP-2) meghatározása ELISA módszerrel történt, szérum mintákból. EREDMÉNYEK Coeliakiás betegcsoportban elvégzett vizsgálataink eredményeit az alábbiakban foglalhatjuk össze: (I) A különféle glikán típusú antitestek közül a gASCA, AMCA, és ACCA az antitest előfordulási gyakorisága szignifikánsan magasabb volt a coeliakia diagnózisának felállításakor az egészséges és a gastrointestinalis kontrollokéhoz képest. Az ALCA IgG és anti-OMP esetén különbséget a vizsgált csoportok között nem találtunk. (II) Összefüggés volt kimutatható a glikán ellenes antitestek szintjei, illetve az EMA és TGA szintek között. (III) Szigorú gluténmentes diétát tartó betegekben kellő hosszúságú idő elteltével a glikán ellenes antitestek a szérumból teljesen eltűntek. (IV) Súlyos malabsorptios betegeknél jóval gyakrabban észleltünk többszörös antitest pozitivitást, míg a nem specifikus gastrointestinális tünetek vagy vashiányos anaemia esetén gyakoribb volt a szeroreaktivitás hiánya, vagy a csupán egy glikán komponens ellen kimutatható reaktivitás. Májcirrhosisos betegcsoportban elvégzett vizsgálataink eredményeit az alábbiakban foglalhatjuk össze:(I) A FCN-2, FCN-3 és MASP-2 szintek szignifikánsan alacsonyabbak voltak cirrhosisos betegekben az egészséges kontrollokhoz képest, és a betegség súlyosságával összefüggően csökkentek. (II) Az alacsony individuális FCN-2 és FCN-3 szintek és méginkább a kombinált fikolin deficiencia jelenléte esetén szignifikánsan gyakrabban alakult ki klinikailag jelentős bakteriális infekció a követési idő alatt, MASP-2 deficiencia esetén ilyen összefüggést nem találtunk. Ez az összefüggés azonban nem volt független a májbetegség súlyosságától. (III) Ugyanakkor sem a FCN profil, sem pedig a MASP-2 deficiencia nem mutatott összefüggést az infekciófüggő mortalitással. KÖVETKEZTETÉSEK Coeliakiás betegcsopotban végzett vizsgálatunk eredményei azt a feltételezést támasztják alá, hogy a gASCA és az egyéb glikán ellenes antitestek kialakulásának oka coeliakiában a károsodott vékonybél nyálkahártyán történő fokozott antigénátjutás. Továbbá, a glikán ellenes antitest pozitivitás a coeliakia jelenlétének és a diétás compliance markereként is értelmezhető. Májcirrhosisos betegekben észlelhető alacsony fikolin szintek a CAID szindróma újonnan azonosított komponensének tekinthetők. Jelentőségük elsősorban az infekciók patogenezise, illetőleg a jövőben esetlegesen terápiás célpontként való figyelembevétel szempontjából lehet. Az infekciók prognosztikájában független kockázati tényezőként azonban nem alkalmazhatók, mert a májbetegség súlyosságával szignifikáns összefüggést mutatnak.INTRODUCTION Changes in the functioning of the cellular and humoral components of the innate immune system play a significant role in the pathogenesis of various chronic inflammatory gastroenterological diseases (e.g. inflammatory bowel diseases (IBD) or coeliac disease) affecting a large patient population. Their insufficient function may lead to the more frequent development of severe infections in various patient groups, such as in cirrhosis. Early pathologic events resulting in coeliac disease are also involved the activation of the innate immune system which mainly takes place in the epithelium. In addition, the presence of various antibodies is the typical characteristic of coeliac disease, even though the background mechanisms of their production and their actual role in the disease pathogenesis are not entirely clarified. Tissue transglutaminase 2 (TG2) is the main autoantigen of anti-endomysial antibodies (EMA) and the analysis of anti-TG2/EMA is a frequent method during the screening and diagnostics of CD. The antibodies produced against the carbohydrate epitopes of the cell walls of various bacteria are the markers of complicated Crohn’s disease. The more frequent presence of anti-Saccharomyces cerevisiae antibody (ASCA) was observed also in coeliac disease. At the same time, the frequency and CD-related clinical significance of other antimicrobial antibodies observed in IBD (ALCA, AMCA, ACCA, anti-OMP) is not clarified. Cirrhosis patients are especially susceptible to bacterial infections due to the cirrhosis-associated immune deficiency syndrome (CAID). However, not all components of this syndrome is known. Lectin pathway molecules of the complement system are synthesised by hepatocytes and have pivotal role in innate host defense against infectious organisms. Ficolins (FCNs) act as soluble pattern recognition molecules, while mannan-binding lectin serine proteases (MASPs) are effective in elimination of pathogens. The low level of functional proteins increases the risk of various infections, especially in immunosuppressive diseases, while their role in bacterial infection related cirrhosis is less known. AIMS The objective of these analyses was to determine the prevalence of various glycan type antimicrobial antibodies in adult CD patients, as well as their correlation with the clinical disease phenotype and the possible connection between their presence and gluten exposition. In addition, a prospectively followed large study was performed in cirrhosis patients with the aim to examine how the serum level of each molecule of the lectin pathway (FCN2, FCN3 and MASP2) changes in comparison with the healthy population and whether there is any correlation with the presence of disease-specific complications. A five-year-long follow-up clinical study was performed to analyse the correlation of the serum level of ficolins and MASP2 molecules with the development of clinically significant bacterial infections and mortality. METHODS ELISA was used to determine the antimicrobial antibodies in coeliac patients and the lectin pathway molecules (FCN-2, FCN-3, MASP-2) in cirrhosis patients from serum samples. RESULTS The results of analysis performed in the coeliac patient group is summarised as follows: (I) Of the various glycan type antibodies, the prevalence of gASCA, AMCA and ACCA antibody was significantly higher than the healthy and gastrointestinal control at the time of setting up the coeliac diagnosis. No difference was found between the examined groups in the case of ALCA IgG and anti-OMP. (II) Correlation was found between the levels of anti-glycan antibodies and those EMA and TGA. (III) In the case of patients on strict gluten-free diet, anti-glycan antibodies totally disappeared from the serum. (IV) Multiple antibody positivity was observed significantly more frequently in the case of patients suffering from severe malabsorption. However, in the case of non-specific gastrointestinal symptoms or iron deficiency anaemia, the lack of seroreactivity or reactivity against a single glycan component were observed more frequently. The results of analysis performed in the cirrhosis patient group is summarised as follows: (I) FCN-2, FCN-3 and MASP-2 levels were significantly lower in cirrhosis patients in comparison with healthy controls and decreased in conformity with disease severity. (II) During the follow-up period, clinically significant bacterial infection developed significantly more frequently in the case of low individual FCN-2 and FCN-3 levels and especially combined ficolin deficiency. At the same time, no such correlation was found in the case of MASP-2 deficiency. However, this correlation was dependent on the severity of liver disease. (III) At the same time, neither the FCN profile, nor MASP-2 deficiency showed any correlation with infection-dependent mortality. CONCLUSIONS The results of our study performed in a coeliac patient group confirmed the assumption that the reason for generation of gASCA and other anti-glycan antibodies is the increased antigen presentation through the impaired small bowel mucosa. In addition, anti-glycan antibody positivity can also be interpreted as the marker of coeliac disease and dietary adherence. Low ficolin levels observed in cirrhosis patients can be regarded as the newly identified component of CAID syndrome. Their primary significance lies in the pathogenesis of infections, while they could also considered as therapeutic target in the future. However, they cannot be used as independent risk factors in the prognosis of infections, because they show significant correlation with the severity of liver diseases.67huCoeliakiaglikánokAnti- Saccharomyces cerevisiae antitestekAnti-outer membrane protein antitestekNOD2/CARD15gluténmentes diétabakteriális transzlokációCrohn betegség májcirrhosisfikolinmannóz-kötő szerin proteázcirrhosisbakteriális infekciókmortalitás Celiac diseaseGlycansAnti-Saccharomyces cerevisiae antibodiesAnti-outer membrane protein antibodyGluten-free dietPresenting symptomsBacterial translocationCrohn’s disease liver cirrhosisficolinmannan-binding lectin serine proteasebacterial infectionmortalityKlinikai orvostudományokOrvostudományok