Király, RóbertCsaholczi, BiankaLengyel, Zsolt2024-06-012024-06-012024https://hdl.handle.net/2437/370738A humán transzglutamináz enzimcsalád legismertebb funkciója a glutamin és lizin fehérje oldalláncok között izopeptid kötés kialakítása Ca2+-függő módon. A legtöbbet kutatott családtag a Transzglutamináz 2 (TG2) fehérje, amely a transzglutamináz aktivitás több típusa mellett katalizálhat GTPáz, ATPáz, protein diszulfid izomeráz, fehérje kináz aktivitásokat is. Interakciós partnerként hozzájárul fehérje komplexek működéséhez. Szerepet játszik például a membrán integritásának, sejtek letapadásának és migrációjának szabályozásában, jelátviteli folyamatokban, illetve a sebgyógyulásban, angiogenezisben. Az emberi testben szinte mindenhol kimutatható, a HUVEC sejtekben is nagy mennyiségben expresszálódik, de az endotél funkciókban játszott szerepe nem teljesen tisztázott. A TG2 HUVEC sejtekben játszott szerepének feltárása érdekében célul tűztük ki TG2 knock out (génkiütött) HUVEC sejtvonal létrehozását és annak a vad típusú sejtekkel történő összehasonlítását. A CRISPR/Cas9 génszerkesztési eljáráshoz egy immortalizált, vad típusú (WT) HUVEC sejtvonalba a TG2 specifikus gRNS-t és Cas9-et egyben kódoló vektort transzfektáltunk. A potenciális TG2-KO sejteket puromycinnel szelektáltuk, majd egyedi TG2-KO HUVEC sejtvonalakat (klónokat) állítottunk elő. A TG2 kiütését Western Blottal és aktivitásméréssel igazoltuk. A TG2 kódoló szekvenciában okozott változást és a potenciális off-target helyek épségét az izolált genomi DNS adott szakaszainak amplifikálása és TOPO klónozása után szekvenálással erősítettük meg egy TG2-KO HUVEC sejtvonalból. A TG2 endotél sejtekben betöltött szerepének tanulmányozásához a TG2-KO és a WT HUVEC sejteket hasonlítottuk össze. A TG2-KO sejtek nem mutattak csökkent adhéziós tulajdonságot fibronektin felszínen, de a TG2-KO sejtek migrációja sebzési teszttel vizsgálva szignifikánsan csökkent. A TG2-KO HUVEC sejtekben mind az endogén, mind az indukált teljes ROS szintet szignifikánsan alacsonyabbnak találtuk, míg a resazurin-resorufin reduktív átalakítását szignifikánsan magasabbnak. A kapott eredmények értelmezéséhez és további TG2-függő változások feltárásához teljes RNS szekvenálást végeztünk, aminek az analízise még folyamatban van. Eredményeink hozzájárulhatnak a TG2 fehérje endotél sejtekben és így a kardiovaszkuláris rendszer egészséges és patológiás működésében játszott szerepének a megértéséhez.51huHUVECtranszglutamináz 2génkiütésOrvostudományBiológiai tudományokHozzáférhető a 2022 decemberi felsőoktatási törvénymódosítás értelmében.