Mokánszki, AttilaMadarász, KristófHavranszki, Levente2023-05-302023-05-302023https://hdl.handle.net/2437/354403A melanoma malignum a bőr daganatos megbetegedéseinek csak mintegy 1%-át teszi ki, mégis ez okozza a legtöbb halálesetet. A leggyakoribb mutáció melanómákban a BRAF p.V600E. Az aktív BRAF transzkripciós faktorok sorozatos aktivációjához vezet, amik számos biológiai folyamatban játszanak szerepet, mint a sejtek differenciációja, proliferációja, növekedése és apoptózisa. A BRAF genetikai eltéréseinek 90%-át egy szomatikus pontmutáció okozza, ami az 1799-es nukleotid helyen bekövetkező timin adenin transzverzió. A genetikai variáns a MEK/ERK konstitutív aktiválódását fokozza, ezáltal lehetővé téve a jelátviteli kaszkád aktiválódását extracelluláris jelek hiányában is. A kutatási munkám célja melanoma malignumos betegek BRAF c.1799T>A; p.V600E mutációs státuszának vizsgálata kórszövettani archivált (FFPE) és liquid biopsziás (vérplazma) mintákból digitális PCR és reverz-hibridizáción alapuló módszerrel. A két módszer összehasonlítása diagnosztikai szenzitivitás és specificitás meghatározása alapján történt retrospektív módon FFPE mintákból. További célkitűzésünk volt, hogy prospektív liquid biopsziás mintagyűjtés után a cfDNS és a szövetből izolált genomi DNS BRAF mutáció státuszát összehasonlítsuk. A retrospektív vizsgálat során 40 archivált FFPE mintából izolált DNS-ből végzett digitális PCR eljárás BRAF c.1799T>A; p.V600E mutációs státuszra vonatkozó diagnosztikai hatékonyságát határoztam meg. A tanulmány prospektív részében 23 liquid biopsziás mintát gyűjtöttünk melanoma malignummal diagnosztizált betegekből, melyhez párosított kórszövettani minták tartoztak. A vérplazma mintákból cfDNS-t, az FPPE mintákból DNS-t izoláltunk, majd BRAF c.1799T>A; p.V600E mutációs státuszát StripAssay és digitális PCR módszerekkel is meghatároztuk. Ezen módszerek diagnosztikai hatékonyságát vizsgáltuk úgy, hogy a valós pozitív (n=11) és a valós negatív (n=12) csoportot az archivált FFPE mintákból izolált DNS mutációs státuszát a StripAssay vizsgálat határozta meg. A kísérletek igazolták, hogy a digitális PCR pontos mutációs státusz meghatározást tesz lehetővé főleg szövettani mintákból, emellett képes abszolút kvantifikációra szemben a StripAssay-vel. A liquid biopszia pedig használható BRAF c.1799T>A; p.V600E mutációs státusz kimutatására, habár a liquid biopsziás cfDNS mintákból készült StripAssay és dPCR vizsgálatok hatékonysága elmarad a rutin biopsziás FFPE mintákhoz képest29huBRAFV600Emelanoma malignumdigitális PCRDEENK Témalista::Orvostudomány::Molekuláris pathológiaHozzáférhető a 2022 decemberi felsőoktatási törvénymódosítás értelmében.