Csősz, ÉvaMárkus, Bernadett2018-05-182018-05-182017http://hdl.handle.net/2437/252491A transzglutaminázok (TGázok) széles körben vizsgált Ca2+-függő enzimek, melyek változatos funkciókkal rendelkeznek. Számos esszenciális fiziológiás és patológiás folyamatban játszanak szerepet azáltal, hogy katalizálják az ɛ-(γ-glutamil)-lizin izopeptid kötések létrejöttét a lizin és glutamin aminosav oldalláncok között. Munkám első felében az volt a célom, hogy egerek üvegtesti mintáiban kétdimenziós gélelektroforézis és tömegspektrometria alapú fehérje azonosítás alkalmazásával olyan fehérjéket azonosítsak, amelyek összefüggésben állnak a proliferatív vitreoretinopátiával (PVR). TG2 jelenlétében és hiányában egyaránt sikerült kimutatnom a PVR-hez köthető fehérjéket az egér üvegtesti mintákban. A diszpáz kezelés hatására a krisztallinok különböző formáinak mennyiségében figyeltem meg a legjelentősebb változásokat, mindemellett eltérő krisztallin profil változást tapasztaltam a vad típusú PVR és TG2 knock-out PVR csoportokban. Munkám során sikerrel alkalmaztam a kétdimenziós elektroforézist és a PVR egérmodellt a diszpáz által indukált PVR-re jellemző fehérje változások és a TG2 hiányában bekövetkező változások tanulmányozására. Eredményeim jó egyezést mutatnak az irodalmi adatokkal, de további funkcionális vizsgálatok szükségesek a megfigyelt jelenség mögött húzódó molekuláris magyarázat felderítésére. Munkám második felében az volt a célom, hogy megvizsgáljam a fehérje keresztkötéseket, illetve azt, hogy hogyan változik a fehérje keresztkötés-profil a neutrofil extracelluláris csapda (NET) képződés során 5-(biotinamido)-pentil-amin és spermin kezelések hatására. A NET fehérjéket elektroforézis és folyadék kromatográffal-kapcsolt tandem tömegspektrometriával tanulmányoztam 4000 QTRAP tömegspektrométeren. Az MS/MS adatok alapján a keletkezett keresztkötések helyét és típusát StavroX keresztkötött fehérje vizsgáló szoftver segítségével azonosítottam. A fehérje keresztkötés mintázatokban változásokat mutattam ki a kezelések hatására. Adataim alapján megállapítható, hogy a keresztkötött fehérje hálózat kialakításáért két folyamat felelős: a TGázok és az mieloperoxidáz (MPO) által katalizált folyamatok, amelyek poliamin klóraminok keresztkötését hozzák létre. Adataink azt mutatták, hogy az MPO és a TGázok együttes jelenléte szükséges a NET megfelelő stabilizációjához.Transglutaminases (TGases) are widely investigated Ca2+-dependent enzymes with diverse functions. They play a role in numerous essential physiological and pathological processes via catalyzing the isopeptide bond formation between lysine and glutamine residues leading to the formation of ɛ-(γ-glutamyl)-lysine bonds. In the first study our aim was to identify proteins associated with proliferative vitreoretinopathy (PVR) in the vitreous bodies of mice using two dimensional electrophoresis and mass spectrometry-based protein identification. We could demonstrate proteins related to PVR in the vitreous bodies of mice both in the presence and lack of TG2. Highest changes in the amount of different forms of crystallins upon dispase treatment were detected. In addition a different crystallin profile change was observed in the wild-type PVR group compared to TG2 knock-out PVR group. The utilization of PVR mice model along with two-dimension gel electrophoresis to analyze the protein changes upon dispase induced PVR formation and the effect of the lack of TG2 was successful. The results are in accordance with data reported in the literature, but further functional studies are needed to elucidate the molecular basis of this phenomenon. In the second study our aim was to investigate the protein cross-links and how the protein crosslink-profile changes during neutrophil extracellular trap (NET) formation upon BPNH2 and SPM treatments. NET proteins were analyzed by electrophoresis and HPLC-coupled tandem mass spectrometry on a 4000 QTRAP mass spectrometer. Based on MS/MS data, the site and the type of cross-links formed were identified using StavroX protein cross-link examination software. We could demonstrate the changes in the protein cross-linking patterns upon the applied treatments and according to our data for the cross-linked protein network formation two processes are responsible: both the TGase and the myeloperoxidase (MPO)-catalyzed polyamine chloramine mediated crosslinks are important. Our data showed that the presence of MPO and TGases together is required for proper NET stabilization.67huTranszglutaminázokTransglutaminasesproliferatív vitreoretinopátianeutrofil extracelluláris csapdaproliferative vitreoretinopathyneutrophil extracellular trapElméleti orvostudományokOrvostudományok