Papp, László AttilaRácz, Dominika Veronika2024-06-242024-06-242024-04-23https://hdl.handle.net/2437/374765A Candida auris a Saccharomycetes osztályba tartozó Ascomycetes élesztőgomba, amely a Clavispora kládhoz tartozik, a többi Candida fajjal együtt. A YAP1 a bZIP transzkripciós faktorok AP-1 alcsaládjába tartozik. Ez a transzkripciós faktor elengedhetetlen a patogén szervezetek oxidatív stressz elleni védekezéséhez Mivel a C. glabrata-ban a YAP1 hiánya oxidatív stressz érzékenységet eredményezett, ezért tűztük ki célul, hogy a rokon C. auris-ból eltávolítjuk a YAP1-et kódoló gént, hogy megvizsgáljuk a gén oxidatív stresszben betöltött szerepét A célom eléréséhez elsőnek a C. auris genomi DNS-ét izoláltam. Előre megtervezett primerek segítségével felszaporítottam a YAP1 gént, illetve a szegélyi régióit. A deléciós konstrukcióhoz szükséges szelekciós markert (NatMX6) összeállítottam, mely lehetővé teszi a nourseothricin-en történő szelektív szaporítást. „Joint PCR” -rel létrehoztam a YAP1 delta konstrukcióját, mely az eredeti genomi környezet 450-450 bázispárjával határolva tartalmazza a NatMX6 marker gént. Később ezt a konstrukciót pJET1.2 vektorba építettem be, amelyet E. coli sejtekbe ligáltam. Ampicillin tartalmú táptalajon történő szélesztés után kolónia PCR-rel a klónozási protokoll transzformációs lépése után keletkezett baktériumkolóniáknál ellenőriztem, hogy a beépült vektor tartalmazza-e a cél génemet. Majd megtisztítottam és felszaporítottam a létrehozott YAP1 delta konstrukciót, amit végül elektroporátorral transzformáltam a C. auris sejtekbe.39huCandida aurisdelécióYAP1Oxidatív stresszPatogén gombaBiológiai tudományokHozzáférhető a 2022 decemberi felsőoktatási törvénymódosítás értelmében.