Papp, FerencTóth, Tünde2017-05-102017-05-102017-05-09http://hdl.handle.net/2437/239876A Kv10.1 feszültségfüggő ioncsatorna aktivációs kapujának funkcióbeli vizsgálatához szükségesek az általunk létrehozott alanin mutánsok. A leendő kísérleteink szempontjából zavaró ciszteineket alaninra mutáljuk. Az alanin aminosavat helyspecifikus mutagenezissel hozzuk létre a megadott pozícióban; így a mutációnkat egy aminosav csere okozza, amelyet a DNS szekvenciájában előidézett változás hoz létre. Ezzel a módszerrel gyorsan és hatékonyan tudjuk elvégezni a mutációkat polimeráz láncreakció (PCR) segítségével. A már mutációt tartalmazó DNS-ünket szuperkompetens baktériumokba transzformáljuk hősokkal; majd speciális táptalajra való szélesztés után a felvett telepeket regenerálódni hagyjuk egy speciális oldatban, hogy a következő lépésként elvégezhessük rajtuk a miniprepalálást, mellyel a plazmid DNS kinyerhetővé válik a további felhasználásra. Végül elvégezzük a plazmid DNS szekvenálását, mellyel megtudhatjuk, hogy sikeresen megtörtént-e a mutáció. E lépések segítenek a sikeres mutáció elérésében, mellyel a későbbi vizsgálatok során hatékonyan vizsgálódhatunk tovább.40huIoncsatornamutagenezisPatch-clampDEENK Témalista::Biológiai tudományok