Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola
Állandó link (URI) ehhez a gyűjteményhez
Általános Orvostudományi Kar
Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola
(vezető: Dr. Csernoch László)
Orvostudományi doktori tanács
D42
tudományág:
-elméleti orvostudományok
Doktori programok:
- Jelátviteli folyamatok sejt- és molekuláris biológiája
(programvezető: Dr. Virág László) - Membránbiofizikai kérdések és vizsgálómódszerek
(programvezető: Dr. Szöllősi János) - Élettan és neurobiológia
(programvezető: Dr. Csernoch László)
Böngészés
Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola Tárgyszó szerinti böngészés "acinar cell"
Megjelenítve 1 - 1 (Összesen 1)
Találat egy oldalon
Rendezési lehetőségek
Tétel Szabadon hozzáférhető Kalcium függő ioncsatornák szerepe szekretoros epitélsejtek működésébenDiszházi, Gyula; Almássy, János; Molekuláris orvostudomány doktori iskola; DE--Általános Orvostudományi Kar -- Élettani IntézetA kutatásom során enzimatikus emésztéssel izolált könny- és hasnyálmirigy acinus sejteken vizsgáltam különböző ioncsatornák szerepét, plazma membránban való elhelyezkedését és működésbeli összefüggéseiket az intracelluláris Ca2+-koncentrációval [Ca2+]i. Az elsődleges könnyszekrétum kiválasztása az egyrétegű epitél sejtrétegen, egyirányba transzportált vízen és ionokon alapszik. Ez a mechanizmus mind a transzporterek, mind az intracelluláris Ca2+-jel aszimmetrikus apiko-bazális eloszlását követeli meg. Az egér könnymirigy acinus sejtekben a Ca2+-függő ioncsatornák azonosítása és lokalizálása volt a fő célunk. Az eredményeink azt mutatják, hogy a Ca2+-függő K+-áram paxillin érzékeny, elhelyezkedése apikálisan kifejezett, bazálisan elhanyagolható, és a Ca2+-függő Cl--árammal azonos membránkompartmentben helyezkedik el. Mindebből feltételezhető, hogy a K+ és a Cl- is az acinuslumenbe szekretálódik, amely magyarázatot ad a primer szekrétum magas luminális Cl- koncentrációjára (∼141 mM), de ellentmond az alacsony K+-koncentrációnak (<17 mM). Az előzőekből következik, hogy a K+ valamilyen mechanizmussal visszajut az acinus sejtbe az elsődleges könnyszekrétumból, ezért feltételeztük a Na+-K+ pumpa jelenlétét a plazma membrán apikális részén. A hipotézist specifikus Na+-K+-pumpa antitest alkalmazásával végzett immunfestéssel ellenőriztük, és igazolást nyert, hogy a bazális mellett az apikális oldalon is található Na+-K+ pumpa a könnymirigy acinus sejten. Eredményeink alapján egy új könnyszekréciós modellt javaslunk, melyben a paracelluláris Na+-transzport kiegészül egy transzcelluláris útvonallal, az ehhez szükséges hajtóerőt pedig a Na+-K+-pumpa biztosítja. Az elsődleges hasnyálmirigy-szekrétum kiválasztásában jelentős szerepe van a hasnyálmirigy acinus sejt [Ca2+]i-jának, ezért célunk az acinus sejtek Ca2+-függő ioncsatornáinak feltérképezése, szerepük tisztázása volt. A QPCR tesztünk alapján nagy expressziót mutatott a TRPM4 csatorna a mirigyben, ezért kísérleteink során az egér hasnyálmirigy acinus sejtekben vizsgáltuk ezen csatorna szerepét. A TRPM4 csatorna egy Ca2+-aktivált nem szelektív monovalens kation csatorna, ezért feltételeztük, hogy a szekretagóg stimulus hatására megemelkedő [Ca2+]i aktiválja azt, és a rajta keresztül a sejtbe áramló kationok depolarizálják a sejtet, a Ca2+ hajtóereje lecsökken, így alacsonyabb lesz a beáramló Ca2+ mennyisége. Kísérleteink során patch-clamp módszerrel igazoltuk, hogy egér hasnyálmirigy acinus sejten található Ca2+-aktivált Na+-áram, amely a TRPM4 gátlószereivel (CBA, 9-Phenanthrol) gátolható volt. Továbbá áram-clamp körülmények között igazoltuk, hogy a Ca2+-függő Na+-áram a sejtmembrán átlagos ∼17 mV-os depolariációját okozza, amely szintén gátolható volt CBA-val. Annak érdekében, hogy tesztelhessük a depolrizáció hatását a Ca2+-beáramlásra, [Ca2+]i méréseket végeztünk, amelyek alapján megállapítható, hogy a Ca2+ beáramlás meredeksége TRPM4 génkiütött és CBA-val kezelt acinus sejteken magasabb a kontrollhoz képest, míg a TRPM4 génkiütött sejteken a Ca2+ beáramlásából származó intracelluláris Ca2+-jel amplitudója is emelkedett. Az eredményeink alapján igazolást nyert a hipotézisünk, miszerint a TRPM4 aktivációja csökkenti a Ca2+-beáramlás hajtóerejét a plazmamembránon keresztül.