F-aktin mérése egyedi sejtekben áramlási és képalkotó citometriával
Dátum
Szerzők
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt
Az aktin fontos szerepet játszik az eukarióta sejtek működésében. Részt vesz a citoplazmatikus sejtváz mikrofilamentális hálózatának a felépítésében, és ezen keresztül többek között a sejtek alakjának a meghatározásában, a sejten belüli mozgások kivitelezésében, a teljes sejtek, sőt az izomkötegek mozgatásában, és kiemelt szerepe van a sejtmembrán funkcióinak a működtetésében is. Részt vesz például a membrán kitüremkedéseknek, a filopódiumoknak és lamellipódiumoknak a létrehozásában, az endo- és exocitótikus folyamatokban és strukturálisan is megerősíti a sejtmembránt. A sejtkortex kialakításával és direkt membránkapcsolatok létesítésével az aktin citoszkeleton részt vesz az eukarióta sejtek plazmamembránjának stabilizálásában is. Munkánk során az volt a célunk, hogy olyan citometriás mérést dolgozzunk ki, amellyel mérni tudjuk az aktin citoszkeletont befolyásoló szerek rövidtávú, akut hatásait. A mérések beállításához a citokalazin D hatását vizsgáltuk elsősorban, mely ismert aktin depolimerizációt okozó szer. A citokalazin D megfelelő működésének a megítélésére először a sejtek életképességére kifejtett hatását vizsgáltuk kolorimetriás tetrazólium teszttel (MTT). Ezután áramlási citometria segítségével fluoreszcenciásan jelzett falloidin felhasználásával meghatároztuk a citokalazin D-nek a tenyésztett sejtekre kifejtett rövidtávú hatását. Az itt kapott eredményeket mikroszkópia és képalkotó citometria segítségével erősítettük meg. Méréseink során megállapítottuk, hogy a citokalazin D-nek a HeLa és JY sejtekre kifejtett akut hatása alapján, nem az általunk várt sejt össz aktin tartalom mérés ad megbízható és gyors eredményt a szer működésének a megítélésére, hanem a sejtek méretbeli változásának a nyomon követése az áramlási citometriás előre irányuló fényszórás (FSC) paraméter, illetve a képalkotó citometriás módszerrel mért sejt terület értékek alapján.