Áramlási citometriai markervizsgálatok optimalizálása hematológiai kórképekben

Absztrakt

A hematológiai kórképekben az áramlási citometriai vizsgálatoknak jelentős szerepe van. A celluláris markervizsgálataim eredményeit az alábbiakban összegzem.

  • A paroxizmális nokturnális hemoglobinuria (PNH) esetén a PNH klón nagysága nem a vvt felszíni markerexpressziója, hanem leginkább a leukociták alapján ítélhető meg. Kimutattam, hogy a monociták CD14 expressziójának vizsgálata a legszenzitívebb marker. Bevezettem egy új áramlási citometriai paramétert a PNH-s klón méretének megítélésére.
  • AML-ben a multidrog rezisztencia (MDR) kimutatási lehetőségeit elemezve arra jutottam, hogy a funkcionális tesztet felszíni markerexpresszióval kombinálva lehetővé válik a malignus sejtek MDR aktivitásának mérése a normál sejtek kizárása mellett. Így különböző centrumok eredményei jobban összevethetők.
  • A véralvadás XIII-as faktora intracelluláris formájának vizsgálatát alkalmaztam AML-ek áramlási citometriai méréseken alapuló differenciáldiagnosztikájában és segítségével, valamint egy speciális mosási technika használatával az AML-ben nem ritkán előforduló trombocita szatellitózisból eredő fals-pozitív reakciókat csökkentettem.
  • Akut limfoblasztos leukémiák jelentős hányadában - aberráns markerexpresszióként – számos módszerrrel kimutattam az FXIII-A intracelluláris megjelenését.
  • A Zap-70 expresszióval kapcsolatos sok technikai ismeret ellenére standard analízis protokollok kidolgozása szükséges lenne. B-CLL-ben önálló prognosztikai faktorként nem ajánljuk használni.
  • Áramlási citometriával ALL-es beteget speciális, az immunfenotípusra is kiható terápia alkalmazása után minimális reziduális betegség meghatározása céljából követve a módszert megbízhatónak és hasznosnak találtam.

The use of flow cytometric immunophenotyping plays an important role in the diagnosis, prognosis and monitoring of hematological diseases. Below is the summary of my flow cytometric marker evaluation. In case of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) the size of the PNH clone can better be assessed by analysis of leukocytes rather than of erythrocytes. The use of the monocot marker CD14 is advised in the detection of PNH clones, since this was found most sensitive. We recommend the use of a new parameter, the MFI rate in the results reporting process. By combining surface staining and a functional assay multidrug resistance (MDR) can be analyzed in different cell subpopulations e.g. T-, B-, or even in leukemic cells. The A subunit of blood coagulation factor XIII (FXIII-A) was utilized in acute myeloid leukemia (AML) subclasssification and by adding a special washing step in the staining process platelet adhesion derived false positivity could be excluded in AML M7. In case of acute lymphoblastic leukemia (ALL) intracellular expression of FXIII-A was found by flow cytometry and verified by several techniques. The flow cytometric analysis of the prognostic factor Zap-70 needs standardization. The use of Zap-70 as an independent prognostic factor is not recommended. By monitoring a patient suffering from ALL, after a unique therapeutical intervention, the flow cytometric method was found to provide sensitive and significant information in the detection of minimal residual disease (MRD) along with the Q-PCR method.

Leírás
Kulcsszavak
immunfenotípus, immunophenotype, akut limfoblaszos leukémia, acute lymphoblastic leukemia, B-sejtes krónikus limfocitás leukémia, B-cell chronic lymphocytic leukemia, paroxizmális nokturnális hemoglobinuira, paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, multidrog rezisztencia, multidrug resistance, minimális reziduális betegség, minimal residual disease, XIII-as véralvadási faktor A alegység, blood coagulation factor XIII subunit A
Forrás