A humán plazmaproteomot reprezentáló Analitkönyvtár létrehozása, jellemzése és felhasználása monoklonális antitestek antigénjeinek azonosítására

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorGuttman, András
dc.contributor.authorKovács, András
dc.contributor.departmentMolekuláris orvostudomány doktori iskolahu
dc.contributor.submitterdepDE--Általános Orvostudományi Kar --
dc.date.accessioned2014-04-29T12:33:24Z
dc.date.available2014-04-29T12:33:24Z
dc.date.created2014hu_HU
dc.date.defended2014-05-15
dc.date.issued2014-04-29T12:33:24Z
dc.description.abstractAz emberi vérplazma rendkívül széles koncentrációtartományban (12 nagyságrend) tartalmaz különböző biológiai funkciójú fehérjéket. Nagyfokú összetettsége folytán a közepes vagy kis mennyiségben megtalálható plazmafehérjék jellemzése és azonosítása nehéz, hosszadalmas, és nagy mintamennyiségeket igényel. A monoklonális antitest-proteomika egy olyan proteomikai eljárás, mely komplex biológiai minták ellen termeltetett nagyszámú olyan monoklonális antitestet alkalmaz profilírozásra, melyek antigénjei ismeretlenek. Az antigének azonosításának folyamata: biológiai minták reagáltatása ellenanyagokkal, immunprecipitáció, SDS-PAGE elemzés, Western blot validálás és tömegspektrometriás analízis. Munkám célja egy olyan több száz frakciót tartalmazó Analitkönyvtár előállítása, jellemezése és monoklonális antitest-proteomikai alapú antigénazonosításra való alkalmazása volt, mely a plazmafehérjéket natív állapotban tartalmazza. Előszor 500 ml normál (egybe gyűjtött) humán plazmát albumin- és immunglobulin-mentesítettem, majd növekvő koncentrációjú ammónium-szulfátos kicsapással előfrakcionáltam. A precipitátumokat gélszűréssel, kation- és anioncserével, továbbá hidrofób interakciós kromatográfiával frakcionáltam tovább. Az Analitkönyvtár jellemzése során dot blot és Western blot módszerrel követtem a D vitaminkötő fehérje szeparációs és dúsulási útját a frakcionálás különböző szintjein, majd ismert antigén specificitású monoklonális antitestekkel vizsgáltam 7 olyan fehérje eloszlását a Könyvtárban, melyeket a plazma kellően nagy mennyiségben tartalmaz ahhoz, hogy globális eloszlás vizsgálatára alkalmasak legyenek, emellett betegségekre jellemző markerek is. Az ismeretlen antigénspecificitású monoklonális antitestekhez tartozó antigének azonosítása a monoklonális antitest-proteomika munkamódszerével történt. Munkám során előállítottam egy 783 frakcióból álló Analitkönyvtárat, mely a fehérjéket natív állapotban tartalmazta. Az egyes frakciókban lévő fehérjék száma a néhány 10-től akár nehány 100-ig is terjedhetett. A karakterizálás bizonyította, hogy a Könyvtár alkalmazható monoklonális antitest-proteomikai alapú antigénazonosításra. A monoklonális antitest-proteomikai alapú antigénazonosítás során 8 ellenanyaghoz tartozó antigént sikerült azonosítani. A kapott eredmények alapján az Analitkönyvtár és a kidolgozott módszer alkalmasnak bizonyult monoklonális antitest-proteomikai alapú antigénazonosításra. A tapasztalatok biztatóak a teljes munkafolyamat jövőbeni felhasználhatóságára nézve a biomarker- és egyéb, fehérjeazonosítást célzó kutatások során.hu_HU
dc.description.correctorNE
dc.format.extent87hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/190743
dc.language.isohuhu_HU
dc.language.isoenhu_HU
dc.subjectAnalitkönyvtárhu_HU
dc.subjectAnalyte Libraryhu_HU
dc.subjectbiomarker
dc.subjectdot blot
dc.subjectfehérjeazonosítás
dc.subjectfrakcionálás
dc.subjectimmunprecipitáció
dc.subjectkromatográfia
dc.subjectmonoklonális antitest-proteomika
dc.subjectplazma
dc.subjecttömegspektrometria
dc.subjectWestern blot
dc.subjectchromatography
dc.subjectfractionation
dc.subjectimmunoprecipitation
dc.subjectmass spectrometry
dc.subjectmonoclonal antibody proteomics
dc.subjectplasma
dc.subjectprotein identification
dc.subject.disciplineElméleti orvostudományokhu
dc.subject.sciencefieldOrvostudományokhu
dc.titleA humán plazmaproteomot reprezentáló Analitkönyvtár létrehozása, jellemzése és felhasználása monoklonális antitestek antigénjeinek azonosításárahu_HU
dc.title.translatedGeneration and characterization of an Analyte Library representing the human plasma proteome and its application for the identification of antigens corresponding to monoclonal antibodieshu_HU
Fájlok
Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)
Megjelenítve 1 - 8 (Összesen 8)
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_ertekezes.docx
Méret:
5.52 MB
Formátum:
Microsoft Word
Leírás:
Az értekezés magyarul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_tezis_magyar.docx
Méret:
601.66 KB
Formátum:
Microsoft Word
Leírás:
A tézisek magyarul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_tezis_angol.docx
Méret:
600.61 KB
Formátum:
Microsoft Word
Leírás:
A tézisek angolul - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_meghivo.docx
Méret:
21.28 KB
Formátum:
Microsoft Word
Leírás:
A védés meghívója - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_ertekezes-t.pdf
Méret:
2.45 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Az értekezés magyarul
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_meghivo-t.pdf
Méret:
17.04 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
A védés meghívója
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_tezis_angol-t.pdf
Méret:
350.29 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
A tézisek angolul
Letöltés
Nem elérhető
Név:
Kovacs_Andras_tezis_magyar-t.pdf
Méret:
377.21 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
A tézisek magyarul
Letöltés
Gyűjtemények
Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola