Szerző szerinti böngészés "Baboss, Anett Vanda"

Megjelenítve 1 - 1 (Összesen 1)
  • Nincs kép
    TételKorlátozottan hozzáférhető
    PACAP hatásai csirke végtagbimbó szövetkultúrákban
    Baboss, Anett Vanda; Juhász, Tamás; Debreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar::Anatómiai, Szövet- és Fejlődéstani Intézet; DE--Általános Orvostudományi Kar; ; Debreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar
    Absztrakt A PACAP (hypophysisadenilát-cikláz aktiváló polipeptid) olyan a központi idegrendszer területén azonosított neuropeptid, melynek pozitív hatásai a perifériás szövetekben is kimutathatóak. Ismert, hogy pozitív hatással van az in vitro porcképződésre, csontképződésre, valamint a porc öregedésében is fontos szerepet játszik. A hedgehog jelátviteli útvonalak aktivitása kiemelkedően fontos a fejlődés során az ujjak szétválásának szabályozásában. A legfontosabb hedgehog típus a sonic hedgehog (SHH), melynek a PACAP szignalizációval való kapcsolata nem azonosított ezen folyamatok során. Kutatásaink során olyan modellrendszer kialakításán dolgoztunk, mellyel in vitro tanulmányozhatjuk a teljes végtagfejlődés során a PACAP szerepét. Ezért célul tűztük ki, hogy csirkeembriókból eltávolított végtagtelepeket egy újszerű végtagkultúraként neveljük, majd különböző PACAP származékokkal kezeljük és a porcképződés molekuláris biológiai változásait nyomon kövessük, valamint kerestük a kapcsolatot a PACAP által indított jelátviteli útvonal illetve a SHH funkciói között. A 4 napos csirkeembriók végtagtelepeit operáló mikroszkóp alatt eltávolítottuk, majd egy szövethálóra helyeztük. A végtagbimbók vágott felszínén a sejtek 48 óra alatt belenőttek a hálóba. A szövetkultúrákhoz kétnaponta PACAP 1-38, 1-27 és 6-38-at adtunk, majd három hétig tartottuk fent azokat. A learatott végtagbimbókból metszeteket készítettünk és vDMMK festéssel a porc szerkezetét vizsgáltuk. RT-PCR és Western blottal nyomon követtük a PKA, Sox9, aggrekán, II-es típusú kollagén és SHH expresszióját, valamint ezek mellett immunhisztokémiai vizsgálatokat is végeztünk. A fenntartott végtagtelepek növekedése és a metakromatikus porc jelenléte szignifikánsan emelkedett a PACAP 1-27, valamint az 1-38 hatására, és csökkent a PACAP 6-38 kezelés következtében. A Sox9, aggrekán és II-es típusú kollagén expressziója emelkedett a PACAP 1-27 és az 1-38 hatására, míg a PACAP 6-38 csökkentette ezen molekulák expresszióját. Az SHH fehérje expressziója a legerősebben a PACAP 1-27 hatására emelkedett. Az eredmények alapján arra következtettünk, hogy a PACAP adagolása megváltoztatta a végtagbimbók növekedését, PACAP 1-27 fokozott porcmátrix termelést eredményezett, míg a PACAP 6-38 gátló hatású. Ezek alapján elmondhatjuk, hogy a PACAP 1-27 hatása a legerősebb és a csirke végtagfejlődést egyfajta differenciálatlan állapotban tartja.