Szerző szerinti böngészés "Dienes, Csaba Bálint"

Megjelenítve 1 - 2 (Összesen 2)
  • Nincs kép
    TételKorlátozottan hozzáférhető
    A 9-phenanthrol elektrofiziológiai hatásai kutya bal kamrai szívizomsejteken
    Dienes, Csaba Bálint; Horváth, Balázs; Szentandrássy, Norbert; Debreceni Egyetem::Általános Orvostudományi Kar; DE--Általános Orvostudományi Kar
    Absztrakt Bevezetés: A kalcium-aktivált tranziens receptor potenciál melastatin 4 (TRPM4) ioncsatornák több élettani folyamatban is szerepet játszanak. A TRPM4 csatorna jelen van a szívben is, azonban arról csak szórványos ismeretekkel rendelkezünk, hogy a TRPM4 ionáram milyen szerepet játszik a kamrai szívizomsejtek elektrofiziológiai sajátságainak létrehozásában. A TRPM4 csatornák széles körben alkalmazott gátlószere a 9-phenanthrol. Célkitűzés: Kísérleteink célja az volt, hogy megvizsgáljuk: a 9-phenanthrol befolyásol-e a TRPM4 ioncsatornán kívül más, a bal kamrai szívizomsejtek akciós potenciáljának (AP) kialakításához nélkülözhetetlen ionáramokat. Módszerek: Vizsgálatainkat a humán szívhez elektrofiziológiai tekintetben leginkább hasonló kutyaszív bal kamrájából enzimatikusan izolált sejteken végeztük 37 °C-on. Az AP-t hegyes mikroelektróda technikával, az ionáramokat pedig a patch-clamp technika teljes sejtes konfigurációjában mértük. Az ionáramok mérésekor a pipettaoldat kalciumpuffert tartalmazott (10 mM BAPTA), ezzel megelőzve a TRPM4-csatornák aktiválását. Kísérleteink során a 9-phenanthrolt 1-30 μM koncentrációban alkalmaztuk. Eredmények: A 9-phenanthrol 10 és 30 μM-os koncentrációban szignifikánsan gátolta a tranziens kifelé irányuló kálium áramot (Ito1), a gyors késői egyenirányító kálium áramot (IKr) és a befelé egyenirányító kálium áramot (IK1). A 30 μM-os koncentráció az IK1-et 17, az IKr-t 40, az Ito1-et 65 %-kal csökkentette, ami részben reverzibilisnek mutatkozott. Az L-típusú kalcium áramot a 9-phenanthrol nem befolyásolta az általunk vizsgált koncentrációkban. A 9-phenanthrol (3-30 μM) szignifikánsan csökkentette a depolarizáció-, az első fázis- és a terminális repolarizáció legnagyobb meredekségét. 30 μM 9-phenanthrol jelenlétében a nyugalmi membránpotenciál nem változott szignifikáns mértékben, azonban a plató fázis közepén mért membránpotenciál csökkent. Az akciós potenciál morfológiájában bekövetkezett változások összhangban vannak az ionáramokon megfigyelt változásokkal. Összegzés: Eredményeink alapján a 9-phenanthrol nem szelektív a TRPM4 csatornákra, így nem használható fel a TRPM4 ionáram kamrai szívizomsejteken történő funkcionális vizsgálatára.
  • Nincs kép
    TételSzabadon hozzáférhető
    A CBA és az ABT-333 emlős kamrai akciós potenciálra és az azt kialakító ionáramokra kifejtett hatásai
    Dienes, Csaba Bálint; Szentandrássy, Norbert; Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola; Általános Orvostudományi Kar::Élettani Intézet
    A TRPM4 a tranziens receptor potenciál csatornacsalád melasztatin alcsaládjának tagja. Expresszióját több humán szervben is kimutatták már. Részt vesz többek közt a membránpotenciál és a Ca2+ homeosztázis szabályozásában ingerlékeny, valamint nem ingerlékeny szövetek sejtjeiben egyaránt. A TRPM4-csatornák a szívben mind a munkaizomrostokban, mind pedig az ingerületvezető rendszerben kimutathatók, mutációjuk ingerületvezetési zavarokat okozhat, továbbá feltételezik, hogy a TRPM4 részt vesz a szívizom hipertrófia, valamint ischaemia-reperfúziós sérülés kialakulásában. Célunk volt megvizsgálni a TRPM4 ioncsatorna expresszióját kutyaszíven valamint egy célzottan a TRPM4-csatorna gátlására kifejlesztett szer, a CBA bal kamrai kutya szívizomsejtekre gyakorolt hatásait feltérképezni. A TRPM4 fehérje kifejeződését elsőként mutattuk ki kutyaszív mind a négy üregének falában, valamint a bal karma falából izolált kardiomiocitákban is. Megállapítottuk, hogy a CBA csökkentette az 1. fázis repolarizáció meredekségét, valamint enyhén növelte az akciós potenciál (AP) amplitúdóját, mely hatásokért valószínűleg a szer tranziens kifelé irányuló káliumáram (Ito) gátló hatása felelős. Az AP rövidülésének tendenciáját az AP feszültség-zár méréseken is látható, plató fázis alatti befelé irányuló áramok, különös tekintettel a késői nátriumáram CBA általi gátlása hozza létre. Eredményeink alapján tehát a CBA nem teljesen szelektív a TRPM4-csatornákra, így a csatorna funkcionális vizsgálatára önmagában natív szöveten nem használható, farmakológiai kombinációban való alkalmazása pedig fokozott körültekintést igényel. A késői egyenirányító káliumáram gyors komponense (IKr) a kamrai izomsejtek 3. fázis repolarizációjában elsődleges szerepet játszik. A csökkent IKr áram hosszú QT-szindrómához és korai utódepolarizációhoz (EAD) vezet, ezért potenciálisan életveszélyes ritmuszavarokat és hirtelen szívhalált okozhat. Az IKr több szelektív gátlószere is ismert, mint például a dofetilid vagy az E-4031. Ezen két vegyület közös tulajdonsága, hogy jelentősen megnövelik a kamrai AP időtartamát és metánszulfonamid csoportot tartalmaznak. Az ABT-333 (dasabuvir) egy hepatitis C fertőzés kezelésében használt vírusellenes szer, amely hasonlóan az IKr kialakításáért felelős hERG-csatornák egyes gátlószereihez (dofetilid és E-4031), szintén tartalmaz metánszulfonamid csoportot. Ezen hasonlóság alapján az ABT-333 is potenciálisan IKr gátló hatással bír, azonban a vegyület kamrai szívizomzatra gyakorolt hatásai még nem ismertek. Az ABT-333 kutya bal kamrai szívizomsejtek AP morfológiára, az AP-t kialakító ionáramokra, valamint expresszált hERG csatornákra gyakorolt hatásainak vizsgálatát tűztük ki célul. 1 μM ABT-333 reverzibilis módon megnyújtotta az AP-t, a 0. és 1. fázis maximális sebessége pedig irreverzibilis csökkenést mutatott. A magasabb ABT-333 koncentrációk nagyobb AP megnyúlást, a korai platópotenciál növekedését és a 0., 1. és 3. fázis maximális sebességének csökkenését okozták. Egyes sejtekben 3-30 μM ABT-333 koncentrációban EAD-k jelentek meg. Az AP feszültség-zár technikával mért 10 μM ABT-333-érzékeny áram egy IKr-nek megfeleltethető késői kifelé irányuló komponenst, valamint egy Ito-nak megfeleltethető korai kifelé irányuló komponenst tartalmazott. Az ABT-333 koncentrációfüggő, részben reverzibilis módon csökkentette a hERG-csatorna által közvetített ionáramot, 3,2 μM-os félgátló koncentrációval. Az ABT-333 a molekuláris szerkezete alapján potenciálisan blokkolja a hERG-csatornákat és az IKr áramot. Ez beigazolódott, mivel 1-30 µM ABT-333 jelenlétében a szív AP megnyúlt és EAD-k jelentkeztek, továbbá csökkent az expresszált hERG csatornák árama is. Az ABT-333 szívritmuszavarok szempontjából biztonságosnak tekinthető, mivel plazmaszintje még túladagolás esetén sem ér el ilyen magas koncentrációt.