Genomszerkesztés fonalas gombákban

Abstract

Az Aspergillus fumigatus Afu8g06260 gén egy potenciális bZIP transzkripciós faktor, amely fontos szerepet játszik a gomba stresszhez való alkalmazkodásban. Tanulmányozásuk ipari és gyógyászati szempontból is kiemelten fontos, mivel mind az ipari termelés, mind a klinikai terápia számára fontos információkhoz juthatunk. A diplomadolgozatom keretén belül egy deléciós konstrukció létrehozása volt a cél, ahhoz, hogy a későbbiekben ezzel egy deléciós mutánst hozzunk létre az adott gén tanulmányozása céljából. A deléciós konstrukció alapvázát a pYTK001 plazmid adta, melyet HincIIvel linearizáltunk. Ebbe építettük be a kiütni kívánt gén előtt és után levő ~1500 bp hosszú UP- és DOWNSTREAM homológ szakaszokat, valamint ezek közé a hygromycin markert a NEBuilder HiFi rendszer segítségével. A konstrukció összeállítását követően transzformáltuk E.coli DH10B sejtekbe, ahol UV fény alatt fluoreszcensen láthattuk a sikeres és sikertelen konstrukciók arányát az sfGFP riporter génnek köszönhetően, amelyet a pYTK001 plazmid tartalmazott. A sikeresen összeállított konstrukciókat ellenőrzés céljából emésztettük HindIII és ScaI enzimek segítségével és agaróz gélen megfuttattuk. A gélkép alapján elmondható, hogy a 4 ellenőrzött plasmid konstrukciónkból 3 megfelelő helyen és módon tartalmazta az általunk integrált fragmenteket.