CAR-T sejtek effektor funkcióinak vizsgálata

Abstract

Az immunrendszer különféle sejtjei és szervei szorosan együttműködve hatékony védelmet nyújtanak a szervezetünkbe került potenciálisan veszélyes ágensekkel szemben. A T-sejtek előalakjai a csontvelőben képződnek és onnan vándorolnak a tímuszba, ahol immunkompetens T-sejtekké érnek. Alapvetően ezek a sejtek a fehérje antigénekből származó peptidek szekvenciáit az antigén prezentáló sejtek (APC) membránján megjelenő MHC-molekulákhoz kötött formában ismerik fel. A T-sejtek specifikus antigén felismerése a TCR/CD3 receptor komplexe által történik, mely kiváltja a klonális proliferációt és a differenciálódást, biztosítva ezáltal az immunrendszer adaptivitását. Pár évtizeddel ezelőtt a T-sejtek génmanipulációjával kiméra antigén receptorral (CAR) rendelkező T-sejteket hoztak létre, mely előnye, hogy nem igényli a fő hisztokompatibilitási komplex (MHC) jelenlétét és képes nem fehérje eredetű antigének felismerésére is, ezáltal eredményes immunterápiás lehetőséget biztosít. A CAR T-sejttel történő hematológiai malignitások kezelése tekintetében a legjobb eredményeket a gyermekkori- illetve felnőtt refrakter B-sejtes akut limfocitás leukémiában érték el. Kutatásom célja a superfolder zöld fluoreszcens fehérjével (sGFP) konjugált CD19 specifikus kiméra antigén receptor (CAR) expressziója CCRF-CEM, T-limfocita sejtvonalban retrovirális transzdukció segítségével. A target sejtek CD19 marker pozitivitás ellenőrzése céljából direkt antitest jelölést alkalmaztunk. Calcein-Red AM alapú ölési assay módszerrel a CAR-T sejt ölési hatékonyságát ellenőriztük, mind a CD19+ mind a CD19- sejtekkel ko-inkubálva, konfokális mikroszkóp segítségével. Sikeresen kimutattuk, hogy az általunk létrehozott harmadik generációs, CD19-specifikus CEM-CAR effektor sejtek képesek immunológiai szinapszisokat kialakítani a tumorsejtek felszínén található specifikus CD19 antigén felismerésének következtében, amelynek eredményeként hatékonyan elpusztították a célzott tumorsejteket.