c-Fos homodimerizációja élő emlős sejtekben

Abstract

A Fos és a Jun transzkripciós faktorok az aktivátor protein-1 fehérjék családjába tartoznak. Az AP-1 transzkripciós faktor család tagjai részt vesznek különböző sejtfolyamatok irányításában, mint a sejtproliferáció, differenciáció, apoptózis és onkogenezis. Ezen család tagjai széles körben kifejeződnek különböző sejttípusokban és szövetekben. A Fos és Jun család proteinjei leucin-cipzárral összekapcsolódó dimerként funkcionálnak és az AP-1 szabályozó elemeihez kötődnek számos emlős gén promóter és enhancer régióiban. A Jun fehérjék homodimert vagy Fos fehérjékkel heterodimert alkothatnak. Ezzel szemben korábban számos közleményben leírták, hogy a Fos fehérjék nem alkotnak homodimert. Kísérleteink során arra kerestük a választ, hogy az overexpresszált Fos transzkripciós faktor képes-e homodimert alkotni. A dimerizáció létrejöttét fluoreszcencia rezonancia energia transzfer (FRET) technikával vizsgáltuk élő HeLa sejtekben konfokális mikroszkóp és áramlási citométer segítségével. Vizsgálatainkhoz CFP-YFP, illetve GFP-mRFP donor-akceptor párral jelölt Fos fúziós fehérjéket használtunk. A teljes hosszúságú Fos molekulák mellett méréseket végeztünk a C-végen megrövidített (Fos215), illetve dimerizációs és DNS-kötő domént nem tartalmazó deléciós mutánsokkal (FosΔΔ) is. A teljes hosszúságú, illetve a Fos215 molekulákkal kapott pozitív FRET hatásfok értékek arra utalnak, hogy a Fos képes élő sejtekben homodimereket alkotni. A negatív kontrollként használt FosΔΔ zérus FRET hatásfokot eredményezett. Eredményeink felhívhatják a figyelmet a Fos homodimerek önálló transzkripciós faktorként való működésének lehetőségére Fos-t overexpresszáló sejtekben.