Kv1.3 csatorna funkcionális expressziójának vizsgálata melanoma sejtvonalban

Abstract

A Kv1.3 feszültségfüggő káliumcsatorna fontos szerepet játszik az immunsejtek működésében, valamint egyes daganattípusokban is megfigyelhető az expressziója, ezért potenciális terápiás célpontként szolgálhat. Jelen vizsgálat célja a Kv1.3 csatorna funkcionális expressziójának vizsgálata B16F10 melanoma sejtvonalban, valamint a csatornához nagy affinitással kötődő, mCherry-vel konjugált Vm24 toxin kötődésének elemzése volt. A kísérletek során áramlási citometriát alkalmaztunk a toxin kötődésének vizsgálatára különböző sejtvonalakon, beleértve a Kv1.3-at nem expresszáló CHO sejteket, a vad típusú Kv1.3 csatornát, valamint a W384F mutáns csatornát expresszáló sejteket. A Kv1.3 csatorna funkcionális jelenlétét B16F10 sejtekben patch-clamp technikával is vizsgáltuk. Az eredmények alapján az mCherry–Vm24 toxin specifikusan kötődött a vad típusú Kv1.3 csatornát expresszáló sejtekhez, míg nem mutatott kötődést sem a nem expresszáló CHO sejtekhez, sem a W384F mutáns csatornát hordozó sejtekhez. A B16F10 melanoma sejtek esetében nem volt kimutatható egyértelmű toxin kötődés. A patch-clamp mérések során nem detektáltunk feszültségfüggő K+ áramot, ami a Kv1.3 csatorna funkcionális hiányára utal. Eredményeink alapján megállapítható, hogy a B16F10 sejtek sejtfelszínén nem igazolható a Kv1.3 csatorna funkcionális expressziója, így a Vm24 toxin nem alkalmas ezen sejtek célzott jelölésére vagy befolyásolására. Az eredmények rámutatnak arra, hogy a Kv1.3-alapú célzott megközelítések alkalmazhatósága nagymértékben függ a csatorna expressziójától az adott daganattípusban.