Leukocin C peptid heterológ expressziója a Saccharomyces 'boulardii' probiotikus élesztőben

Abstract

A diplomamunkám célja egy olyan S. ’boulardii’ törzs tervezése volt, amellyel a célzott terápia lehetőségét próbáltuk tesztelni a Leukocin C peptid kódoló gén genomba való integrálásával és heterológ expressziójával. Az élesztőre optimalizált, plazmidon kódolt Leukocin C gént már transzformálták S. 'boulardii'-ba, mely eredményeképpen a törzs képes volt antimikrobiális peptid termelésére (Hudson és mtsai., 2014). A munka során egy Leukocin C tartalmú plazmidot terveztünk elkészíteni Golden Gate reakcióval, amelyhez Leukocin C kódoló gént, promóter-, terminátor-, és egyéb régiókat használtunk. A CRISPR/Cas9 genomszerkesztési módszer segítségével integráltuk a Leukocin C-t kódoló ORF-t a probiotikus élesztő genomjába. Emellett vizsgáltuk a törzs antagonizmusát különböző baktériumfajokkal szemben. A munka eredményeképpen egy olyan probiotikus törzs állna rendelkezésre, mely bizonyítottan alkalmas terápiás peptidek heterológ expressziójára.