A PPARbeta/delta szerepe Her2 pozitív emlőtumorsejtekben

Abstract

A peroxiszóma proliferátor által aktivált receptorok (PPARok) a magreceptorokhoz tartoznak, három izoformájuk ismert: PPARα, PPARβ/δ és PPARγ. Kutatásunk a PPARβ/δ-ra fókuszál, amely retinoid X receptorral (RXR) heterodimert alkotva, célgénjeit endogén ligandokra és szintetikus agonistákra válaszul szabályozza. A PPARβ/δ fontos szerepet tölt be a sejtek lipid anyagcseréjében, a tumorsejtekben fokozott expressziója hozzájárulhat a daganatprogresszióhoz, ugyanakkor a PPARβ/δ jelentősége HER2-pozitív emlőráksejtekben nem tisztázott. Kísérleteink célja a PPARβ/δ GW501516 ligand általi aktivációja volt SKBR3 HER2-pozitív emlőtumor sejtvonalon, különös tekintettel a sejtproliferációban és a génexpressziós mintázatban bekövetkező változásokra. Vizsgáltuk a GW501516 szelektív PPARβ/δ és az LG100268 szelektív RXR agonista egyedi és kombinált hatását is. A sejtek proliferációját PrestoBlue-alapú viabilitásméréssel, valamint sejtszámláláson alapuló proliferációs assay vizsgálattal elemeztük. A transzkripció szintű változások elemzésére NGS alapú RNS-szekvenálást végeztünk, amely alapján a differenciálisan expresszálódó géneket azonosítottuk a GW501516 és LG100268 kezelt minták között. Az eredményt a Galaxy szerverével elemeztük, az így kapott differenciálisanexpresszálódó gének listáján pathway analízist futtatunk. A PPARβ/δ jelátvitel célgénjeinek az expresszióját kvantitatív PCR-rel elemeztük. A fehérjeszintű változások követésére Western-blot analízist alkalmaztunk. Az eredmények azt mutatták, hogy az RXR receptor aktiválása mérsékelten, a PPARβ/δ erőteljesebben, míg a két agonista együttes alkalmazása jelentősen fokozta a PPARβ/δ jelátvitel egyik ismert célgénje, az ANGPTL4 expresszióját. A fehérjeszinten vizsgált PRDX1, Annexin A1 fehérjék mennyiségének változásai GW501516, LG100268, illetve kombinált kezelés hatására azonban a szinergia irányába mutattak. RNS szekvenálás megmutatta, hogy a PPARβ/δ és az RXR aktiváció hatására számos gén differenciáltan fejeződik ki. A GW501516 PPARβ/δ agonista fokozta a proliferációt, míg az LG100268 kezelés csökkent sejtszámot eredményez három napos inkubációt követően. Az eredményeink alapján megállapítható, hogy a PPARβ/δ magreceptor aktiválása kulcsfontosságú szerepet tölthet be az HER2-pozitív emlőráksejtek progressziójában.