Alfavírus proteáz szubsztrátok helyspecifikus mutagenezisére és expressziójára alkalmas rendszer optimalizációja
| dc.contributor.advisor | Tőzsér, József | |
| dc.contributor.author | Bordán, Zsuzsanna | |
| dc.contributor.department | DE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézet | hu_HU |
| dc.date.accessioned | 2013-05-13T12:04:29Z | |
| dc.date.available | 2013-05-13T12:04:29Z | |
| dc.date.created | 2013-05-06 | |
| dc.date.issued | 2013-05-13T12:04:29Z | |
| dc.description.abstract | Az Alphavirus nemzetség a Togaviridae családhoz tartozik, melynek tagjai kisméretű, burokkal rendelkező, pozitív szálú RNS vírusok. Az alfavírusok négy nem-szerkezeti fehérjéje speciális aktivitásokkal bír, melyek közül vizsgálataink során a legnagyobb, az nsP2 fehérje jut fontos szerephez, melynek proteolitikus aktivitása is ismert. Laboratóriumunk korábbi tanulmányok során már vizsgálta három alfavírus családból származó nsp2 fehérje proteáz aktivitását oligopeptid szubsztrátokon, mely során azt tapasztaltuk, hogy ezen nsP2 proteázok jelen formában nem nyújtanak számottevő előnyöket a biotechnológiai gyakorlatban már sikeresen alkalmazott TEV és TVMV proteázok hasonló paramétereivel szemben. Azért, hogy vizsgálni tudjuk az nsP2 fehérje aktivitását a módosított szubsztrátokon, laboratóriumi munkatársaim korábban egy olyan expressziós rendszert hoztak létre, amely restrikciós endonukleázok segítségével biztosítja az expressziós és mutagenizáló plazmid közötti átjárhatóságot. A kutatásaim során elsődleges feladatom volt ennek a létrehezott rendszernek a vizsgálata, optimalizációja, ezen kívül az SFV-1 oligopeptid P1’ helyen módosított aminosavat tartalmazó formáinak előállítása, expressziója és tisztítása. Eddig a lehetséges változatok közül 9 mutáns szubsztrát szekvenciáját sikerült előállítanunk és visszahelyezni az expressziós rendszerbe. Megtörtént az expresszió és a tiszítási protokoll optimalizálása is. Mostanáig a mutáns szubsztrátok közül egyet expresszáltunk és tisztítottunk, illetve megtörtént TEV proteázzal való hasítása is, amely igazolta, hogy a fúziós fehérjénk konformációja a további kutatási céljainknak megfelel. | hu_HU |
| dc.description.corrector | gj | |
| dc.description.course | Biotechnológia | hu_HU |
| dc.description.degree | MSc/MA | hu_HU |
| dc.format.extent | 30 | hu_HU |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2437/168047 | |
| dc.language.iso | hu | hu_HU |
| dc.subject | alfavírus | hu_HU |
| dc.subject | proteázok | hu_HU |
| dc.subject | nsp2 | hu_HU |
| dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Biokémia | hu_HU |
| dc.title | Alfavírus proteáz szubsztrátok helyspecifikus mutagenezisére és expressziójára alkalmas rendszer optimalizációja | hu_HU |