A PAF antifungális fehérje és variánsainak letekeredése dimetil-szulfoxid hatására

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorCzajlik, András
dc.contributor.advisordeptDebreceni Egyetem::Természettudományi és Technológiai Kar::Kémiai Intézethu_HU
dc.contributor.authorBatta, Ágnes
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Karhu_HU
dc.contributor.opponentLekli, István
dc.contributor.opponentdeptDebreceni Egyetem::Gyógyszerésztudományi Kar::Gyógyszerhatástani Tanszékhu_HU
dc.date.accessioned2019-01-23T12:55:13Z
dc.date.available2019-01-23T12:55:13Z
dc.date.created2018
dc.description.abstractA vizsgálat tárgya a PAF fehérje és annak néhány pontmutánsa volt; korábban a PAF hideg-meleg letekeredését már vizsgálták NMR-el, jelen munkában ezt a kémiai denaturálás módszereivel kívántuk kiegészíteni, amihez dimetil-szulfoxidot (DMSO) alkalmaztunk. A vizsgált négy fehérje esetén a DMSO koncentráció függvényében a mért termogramokból meghatároztam a Tm olvadáspont és a dH letekerési entalpia változását. A Tm lineáris csökkenése igazolja a DMSO denaturáló hatását, ami - a fehérje változattól függetlenül - hasonlóan érzékeny a DMSO koncentrációra. A DMSO nélküli pufferben D19S változat Tm értéke a legkisebb (+91.6 °C). Bár a dH értékelése kevésbé megbízható, az előzetes eredmények szerint értéke a natív PAF-ra volt a legnagyobb, ami a natív forma nagyobb stabilitására utal. A PAF esetén a DMSO koncentráció függvényében állandó (+37 °C) hőmérsékleten követtük a 15N HSQC spektrumok NMR jeleinek eltolódását és intenzitását. Hat reprezentatív csúcs elemzésével, kétállapotú modellt feltételezve megállapítható volt a DMSO indukálta letekeredés dG szabad entalpiája [~ 23 kJ/M] és ~70 v/v% (9.7M) DMSO koncentrációnál a PAF fele már letekeredett, az 50 v/v % (7M) DMSO-t tartalmazó, +37 °C hőmérsékletű oldatban a PAF 15N NMR relaxációs paramétereit (T1, T2, 15N/1H NOE) értékelve a Lipari-Szabó módszerrel a rend paraméterre inkább a rendezett fehérjékre jellemző magas (S2 ~ 0.8-0.9) értékeket kaptuk, néhány lokális kivételtől eltekintve (2, 11, 19, 31, 49) a flexibilis loop régiókban. Ez arra utal, hogy az NMR kísérleteinkben valójában csak a feltekeredett PAF-ot tudjuk detektálni, és a jelintenzitások csökkenéséből tudunk következtetni a letekeredésre, azonban a feltekert PAF kémiai eltolódásai eltérő módon reagálnak a DMSO titrálásra, így valószínűsíthető, hogy a PAF térszerkezete is módosul DMSO jelenlétében.hu_HU
dc.description.courseklinikai laboratóriumi kutató mesterképzéshu_HU
dc.description.courseactnappalihu_HU
dc.description.courselangmagyarhu_HU
dc.description.degreeMSc/MAhu_HU
dc.format.extent44hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/263173
dc.language.isohuhu_HU
dc.subjectDMSOhu_HU
dc.subjectPAFhu_HU
dc.subjectDSChu_HU
dc.subjectNMRhu_HU
dc.subjectfehérjehu_HU
dc.subjectletekeredéshu_HU
dc.subjectantifungálishu_HU
dc.subject.dspaceDEENK Témalista::Biológiai tudományok::Biofizikahu_HU
dc.titleA PAF antifungális fehérje és variánsainak letekeredése dimetil-szulfoxid hatásárahu_HU
dc.title.translatedUnfolding of the antifungal protein PAF and it's variants in dimethyl sulfoxide solutionshu_HU
Fájlok
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)