A Schizosaccharomyces octosporus feltételezett med8+/sep15+ homológ génjének klónozása és expresszálása Schizosaccharomyces pombe sep15- mutánsban
Dátum
Authors
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
DOI
Absztrakt
A szakdolgozati munka célja az volt, hogy Sch. octosporus sep15/med8 homológ génjét a fehérje aminosav-sorrendjének elemzésével megkeressük. A S. pombe teljes genomszekvenciája ismert, míg a Sch. octosporus genomi szekvenciájának is elég nagy hányada ismert, így nagy valószínűséggel találhatunk hasonlóságot az adatbázisban. Ha sikerült azonosítani a gént, a DNS szekvenciájának felhasználásával specifikus PCR primereket tervezhetünk rájuk, melyek a megfelelő helyen restrikciós vágóhelyeket tartalmaznak, így klónozni tudjuk a felszaporított génszakaszt egy expressziós vektorba. Ezután transzformálhatjuk az új plazmidkonstrukcióval a sep15 génben sérült Sch. pombe pontmutáns törzset. A sikeres transzformációt követően szelektív táptalajon tenyésztjük tovább az így alkotott törzseket a szelekciós nyomás fenntartása végett. Az elkészült és leellenőrzött tenyészeteket fenotípusos vizsgálatoknak vetjük alá. Mikroszkóp alatt ellenőrizzük, hogy a transzformált sejtek hasonlóan viselkednek-e a szeptációban sérült törzshöz, vagy komplementálják az elrontott fehérjét és a vad típusra hasonlítanak-e.