Transzglutamináz 2 gén kiütésének hatása a HUVEC sejtekben

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorKirály, Róbert
dc.contributor.advisorCsaholczi, Bianka
dc.contributor.advisordeptÁltalános Orvostudományi Kar::Biokémiai és Molekuláris Biológiai Intézet
dc.contributor.authorLengyel, Zsolt
dc.contributor.departmentDE--Általános Orvostudományi Kar
dc.date.accessioned2024-06-01T09:09:16Z
dc.date.available2024-06-01T09:09:16Z
dc.date.created2024
dc.description.abstractA humán transzglutamináz enzimcsalád legismertebb funkciója a glutamin és lizin fehérje oldalláncok között izopeptid kötés kialakítása Ca2+-függő módon. A legtöbbet kutatott családtag a Transzglutamináz 2 (TG2) fehérje, amely a transzglutamináz aktivitás több típusa mellett katalizálhat GTPáz, ATPáz, protein diszulfid izomeráz, fehérje kináz aktivitásokat is. Interakciós partnerként hozzájárul fehérje komplexek működéséhez. Szerepet játszik például a membrán integritásának, sejtek letapadásának és migrációjának szabályozásában, jelátviteli folyamatokban, illetve a sebgyógyulásban, angiogenezisben. Az emberi testben szinte mindenhol kimutatható, a HUVEC sejtekben is nagy mennyiségben expresszálódik, de az endotél funkciókban játszott szerepe nem teljesen tisztázott. A TG2 HUVEC sejtekben játszott szerepének feltárása érdekében célul tűztük ki TG2 knock out (génkiütött) HUVEC sejtvonal létrehozását és annak a vad típusú sejtekkel történő összehasonlítását. A CRISPR/Cas9 génszerkesztési eljáráshoz egy immortalizált, vad típusú (WT) HUVEC sejtvonalba a TG2 specifikus gRNS-t és Cas9-et egyben kódoló vektort transzfektáltunk. A potenciális TG2-KO sejteket puromycinnel szelektáltuk, majd egyedi TG2-KO HUVEC sejtvonalakat (klónokat) állítottunk elő. A TG2 kiütését Western Blottal és aktivitásméréssel igazoltuk. A TG2 kódoló szekvenciában okozott változást és a potenciális off-target helyek épségét az izolált genomi DNS adott szakaszainak amplifikálása és TOPO klónozása után szekvenálással erősítettük meg egy TG2-KO HUVEC sejtvonalból. A TG2 endotél sejtekben betöltött szerepének tanulmányozásához a TG2-KO és a WT HUVEC sejteket hasonlítottuk össze. A TG2-KO sejtek nem mutattak csökkent adhéziós tulajdonságot fibronektin felszínen, de a TG2-KO sejtek migrációja sebzési teszttel vizsgálva szignifikánsan csökkent. A TG2-KO HUVEC sejtekben mind az endogén, mind az indukált teljes ROS szintet szignifikánsan alacsonyabbnak találtuk, míg a resazurin-resorufin reduktív átalakítását szignifikánsan magasabbnak. A kapott eredmények értelmezéséhez és további TG2-függő változások feltárásához teljes RNS szekvenálást végeztünk, aminek az analízise még folyamatban van. Eredményeink hozzájárulhatnak a TG2 fehérje endotél sejtekben és így a kardiovaszkuláris rendszer egészséges és patológiás működésében játszott szerepének a megértéséhez.
dc.description.courseorvosi diagnosztikai analitikus
dc.description.courseactnappali
dc.description.courselangmagyar
dc.description.coursespecOrvosi kutatólaboratóriumi analitika
dc.description.degreeBSc/BA
dc.format.extent51
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/2437/370738
dc.language.isohu
dc.rights.accessHozzáférhető a 2022 decemberi felsőoktatási törvénymódosítás értelmében.
dc.subjectHUVEC
dc.subjecttranszglutamináz 2
dc.subjectgénkiütés
dc.subject.dspaceOrvostudomány
dc.subject.dspaceBiológiai tudományok
dc.titleTranszglutamináz 2 gén kiütésének hatása a HUVEC sejtekben
Fájlok
Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)
Megjelenítve 1 - 1 (Összesen 1)
Nincs kép
Név:
Transzglutamináz 2 gén kiütésének hatása a HUVEC sejtekben.pdf
Méret:
1.43 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Szakdolgozat
Megjelenítés
Engedélyek köteg
Megjelenítve 1 - 1 (Összesen 1)
Nincs kép
Név:
license.txt
Méret:
2.35 KB
Formátum:
Item-specific license agreed upon to submission
Leírás:
Letöltés
Gyűjtemények
Hallgatói dolgozatok (Általános Orvostudományi Kar)