A gerjesztő fényintenzitás és az antitest jelölési arányának hatása a kvantitatív fluoreszcenciás mérésekre

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorNagy, Péter
dc.contributor.authorSzendi-Szatmári, Tímea
dc.contributor.authorvariantSzatmári, Tímea
dc.contributor.departmentMolekuláris orvostudomány doktori iskolahu
dc.contributor.submitterdepDE--Általános Orvostudományi Kar -- Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
dc.date.accessioned2021-01-20T07:37:51Z
dc.date.available2021-01-20T07:37:51Z
dc.date.created2020hu_HU
dc.date.defended2021-02-04
dc.description.abstractA fluoreszcens vizsgálatok, mérések során a minél jobb jel-zaj arány elérése érdekében a két leggyakrabban alkalmazott módszer az antitestek jelölési arányának növelése, illetve a gerjesztési fény intenzitásának fokozása. Ellenben ezek nem kívánatos módon befolyásolják méréseinket, ezzel téves számításokat eredményezve. Kísérleteink során kiderült, hogy az antitestek fluoreszcens festékekkel történő jelölése negatívan befolyásolja az antitestek affinitását és a fluoreszcens festékek kvantumhatékonyságát. A magas jelölési aránnyal rendelkező antitestek alulreprezentáltak lesznek a sejthez kötött frakcióban a csökkent affinitás miatt. Továbbá a fluorofórok között lejátszódó energiatranszfer, illetve kioltásos folyamatok csökkent fényességet fognak eredményezni. Mindezek mellett mikroszkópos mérések során a nagy numerikus apertúrájú objektív fókuszpontjában a megvilágító fény intenzitása olyan nagy, hogy a fluorofórok szaturálódnak. Modellszámításokkal és kísérletes mérésekkel is alátámasztottuk, hogy a hagyományos képlettel számolt FRET hatékonyság nagymértékben csökken a gerjesztő foton-fluxus függvényében. Sikeresen létrehoztunk olyan modelleket, melyek figyelembe veszik a donor szaturációt és a FRET frusztrációt is. Alkalmazásuknak köszönhetően a FRET hatékonyság és annak kiszámolásához szükséges  faktor szinte teljesen függetleníthető a megvilágító lézer intenzitásától. Összefoglalásként elmondható, hogy mindezen mérések, modellek, számítások nagymértékben hozzájárulnak a kvantitatívabb, pontosabb fluoreszcens mérések kivitelezéséhez.hu_HU
dc.description.abstractIn order to achieve the best possible signal-to-noise ratio during fluorescence measurements, the two most commonly used methods are to increase the labeling ratio of antibodies and to increase the intensity of the excitation light. Nonetheless, they affect our measurements undesirably, resulting in erroneous calculations. In our experiments, it was found that labeling antibodies with fluorescent dyes negatively affects the affinity of the antibodies and the quantum efficiency of the fluorescent dyes. Antibodies with high DOL will be underrepresented in the cell-bound fraction due to their decreased affinity. Furthermore, the energy transfer and quenching processes between the fluorophores will result in reduced brightness. In addition, during microscopic measurements, the intensity of the illumination light at the focal point of a large numerical aperture objective is so high that the fluorophores saturate. With model calculations and experimental measurements we also confirmed that the FRET efficiency calculated by the conventional formula greatly decreases as a function of the excitation photon flux. We have successfully created models that take both donor saturation and FRET frustration into consideration. By applying these equations the dependence on the illumating laser intensity of the FRET efficiency and the  factor required FRET calculations can be almost completely eliminated. In summary, all these measurements, models and calculations significantly contribute to the implementation of more quantitative, accurate and device-independent fluorescence measurements.hu_HU
dc.format.extent120hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/301328
dc.language.isohuhu_HU
dc.language.isoenhu_HU
dc.subjectantitesthu_HU
dc.subjectantibodyhu_HU
dc.subjectantitest jelölés
dc.subjectlabeling of antibody
dc.subjectjelölési arány
dc.subjectaffinity of antibody
dc.subjectfluorofór
dc.subjectantitest affinitás
dc.subjectfesték kvantumhatékonyság
dc.subjectquantum efficiency of dye
dc.subjectFRET
dc.subjectFRET hatékonyság
dc.subjectFRET efficiency
dc.subjectfluorofór szaturáció
dc.subjectfluorophore saturation
dc.subjectFRET frusztráció
dc.subjectFRET frustration
dc.subjectmikroszkópia
dc.subjectmicroscopy
dc.subjectfoton-fluxus
dc.subjectphoton flux
dc.subject.disciplineElméleti orvostudományokhu
dc.subject.sciencefieldOrvostudományokhu
dc.titleA gerjesztő fényintenzitás és az antitest jelölési arányának hatása a kvantitatív fluoreszcenciás mérésekrehu_HU
dc.title.translatedThe effect of excitation light intensity and the degree of labeling of antibody on the quantitative fluorescent measurementshu_HU
Fájlok
Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)
Megjelenítve 1 - 4 (Összesen 4)
Nincs kép
Név:
Szendi_Szatmari_Timea_meghivo_titkositott.pdf
Méret:
247.68 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Meghívó
Letöltés
Nincs kép
Név:
Szendi_Szatmari_Timea_magyar_tezis.pdf
Méret:
917.08 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
tézis
Letöltés
Nincs kép
Név:
Szendi_Szatmari_Timea_angol_thesis.pdf
Méret:
837.83 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
thesis
Letöltés
Nincs kép
Név:
Szendi_Szatmari_Timea_Disszertacio.pdf
Méret:
2.2 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
értekezés
Letöltés
Engedélyek köteg
Megjelenítve 1 - 1 (Összesen 1)
Nincs kép
Név:
license.txt
Méret:
1.93 KB
Formátum:
Item-specific license agreed upon to submission
Leírás:
Letöltés
Gyűjtemények
Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola