Mikrofluidikai immobilizált enzimreaktorok kialakítása proteomikai alkalmazásokhoz

Abstract

PhD munkám során mikrofluidikai immobilizált enzimreaktorok kifejlesztésével foglalkoztunk, melyek jelentősen lecsökkentik a bottom-up proteomikai munkafolyamatok időigényét, ezen belül is a fehérjék enzimatikus emésztését. Ezen mikroreaktorok nagyságrendekkel gyorsabb emésztéseket tesznek lehetővé (oldatfázisban végbemenő reakcióknál megszokott 16 óra hosszú reakcióidő helyett percek alatt végbemegy az emésztés). A mikroreaktorokat off-line (mikrofluidikai csipek) és in-line (kvarckapilláris) elrendezésben alakítottuk ki. A peptidelegyek CZE-MS/MS elemzését megelőző sómentesítés hatását is megvizsgáltuk, tekintettel a lehetséges mintaveszteségre és a különböző mintamátrixok által előidézett on-line minta-stacking jelenségekre. During my PhD work we developed microfluidic immobilized enzymatic reactors that can accelerate bottom-up proteomic workflows, more specifically the enzymatic digestion step of proteins. The use of these microreactors allowed a significant reduction in reaction times (~ min, instead of the overnight digestion in solution phase). Both off-line (microfluidic chips) and in-line (fused silica capillary) arrangements were realized. Furthermore, the necessity of sample clean-up prior to CZE-MS/MS analysis was also investigated, regarding peptide loss and sample-stacking phenomena induced by different sample matrices.