Az I-es típusú humán immundefíciencia vírus kapszid mutánsainak "in vitro" vizsgálata
dc.contributor.advisor | Tőzsér, József | |
dc.contributor.advisor | Kádas, János | |
dc.contributor.author | Tóth, Ferenc | |
dc.contributor.department | DE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézet | hu_HU |
dc.date.accessioned | 2009-11-30T13:59:53Z | |
dc.date.available | 2009-11-30T13:59:53Z | |
dc.date.created | 2009 | |
dc.date.issued | 2009-11-30T13:59:53Z | |
dc.description.abstract | Ahogy azt többek között munkacsoportunk is bizonyította, a humán immundeficiencia vírus kapszid fehérjéje enyhén savas közegben szubsztrátja a virális proteáznak és a hasítása feltételezhetően hozzájárul a receptor-mediált endocitózis útvonalon belépő virion dekapszidációjához. A folyamat további bizonyítására olyan mutánsok előállítását terveztük, melyek hasítása fokozott mértékű, vagy blokkolt. Ezeket a későbbiekben rekombináns virionokba tervezzük bejuttatni. Az azonosított hasítási helyeket figyelembe véve egy rekombináns, N-terminálisan hisztidineket kódoló kapszid konstrukcióban olyan mutációkat hoztunk létre helyspecifikus mutagenezissel (W23A, A77P, A78V, L189F, L189I, L189P és L190K), amelyek várakozásaink szerint befolyásolják a proteáz általi hasítást. Ezeken a mutáns kapszid fehérjéken, a korábban a vad típusú kapszid hasításánál is alkalmazott körülmények között vizsgáltuk a proteolízis hatékonyságát. A mutáns fehérjéket E. coli sejtekben expresszáltuk, affinitás kromatográfiával tisztítottuk, majd vizsgáltuk mint a retrovirális proteáz szubsztrátjait. A hasításokat SDS-poliakriamid géleken történő futtatással illetve MALDI-TOF analízissel ellenőriztük. A várakozásainknak megfelelően a mutációk jelentős változásokat okoztak a kapott fehérjemintázatokban. Az A77P, L190K és L189P mutáció esetén egyértelműen bizonyítottuk a 77. illetve a 190. oldallánc melletti hasítás elmaradását, míg az A78V és L189F mutációk a 77. és 189. oldallánc melletti hasítás fokozódását eredményezték. Más mutációk (W23A és L189I) esetén azonban felmerült a bevitt mutáció következtében megváltozott helyű hasítás lehetősége is. További terveink között szerepel a mutánsok in vivo vizsgálata is, amelyhez a munkacsoportunk által már alkalmazott és speciálisan módosított virális vektorokat használjuk fel. | hu_HU |
dc.description.corrector | gj | |
dc.description.course | Molekuláris biológus | hu_HU |
dc.description.degree | régi képzés | hu_HU |
dc.format.extent | 33 | hu_HU |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2437/90567 | |
dc.language.iso | hu | hu_HU |
dc.subject | HIV-1 | hu_HU |
dc.subject | retrovírus | hu_HU |
dc.subject | kapszid | hu_HU |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Biokémia | hu_HU |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Molekuláris biológia | hu_HU |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok::Mikrobiológia | hu_HU |
dc.title | Az I-es típusú humán immundefíciencia vírus kapszid mutánsainak "in vitro" vizsgálata | hu_HU |