sep10/med31 mutáns allél vizsgálata Schizosaccharomyces pombe modellszervezetben
Absztrakt
Munkám során a Mediátor komplex egyik alegységét kódoló gént, a Sch. pombe hasadó élesztő sep10/med31 génjét vizsgáltam. Célunk a gén funkciójának részletesebb megismerése volt a Genetikai és Alkalmazott Mikrobiológiai Tanszék korábbi munkáival összhangban. Bioinformatikai vizsgálatokkal azt szerettük volna kideríteni, hogy a vizsgált gén megtalálható-e más magasabbrendű fajokban. Amint a 10.-es ábra mutatja, az általunk vizsgált gén és terméke megtalálható az élesztőktől az emberig. Különböző fajok Med31 fehérjéit összehasonlítva arra kerestük a választ, hogy hol találhatóak konzerválódott aminosavak és konzervatív régiók a génterméken belül. A 12.-es ábra ezt mutatja be. Néhány faj Med31 fehérjeszekvenciáját páronként is összeillesztettük a Sch. pombe Sep10/Med31 fehérje szekvenciájával. Az eredményeink alapján szignifikáns homológiát tapasztalhatunk még a filogenetikailag távoli egyedek között is. A legnagyobb hasonlóságot és azonosságot egy 69 aminosavat tartalmazó szakaszon találtuk Sch. pombe esetén. A molekuláris kísérletek során a Sch. pombe sep10 génből két mutáns allélkonstrukció jött létre a Sch. pombe sep10F1 és a Sch. pombe sep10F1mut allél. Az első konstrukció 128 aminosavat kódolt, míg a mutáns F1 konstrukció 113 aminosavat. A kész plazmidkostrukciókat sikeresen betranszformáltuk sep10 mutáns Sch.pombe törzsbe. A transzformáns sejteket további szempontok alapján vizsgáltuk. Morfológiájuk alapján kiderült, hogy a Sch. pombe sep10F1 és a Sch. pombe sep10F1mut gént tartalmazó sejtekben helyreállt a Sch. pombe sep10/med31 deléciós mutánsának normálistól eltérően láncokat képező fenotípusa és a spórázó képessége is EMMA + adenin és MSA táptalajokon, pREP41+ Sch. pombe sep10vad transzformánshoz hasonlóan. Az érzékenységi vizsgálatból az is kiderül, hogy a Sch. pombe sep10F1 és a Sch. pombe sep10F1mut csonkolt allélok képesek helyreállítani az Sch. pombe sep10/med31 deléciós mutánsának kálium, kálcium, vas, réz, kadmium és molibdén kation terhelésre adott érzékeny fenotípusát. Összességében tehát elmondható, hogy a gén 128, valamint 113 aminosavból álló fehérjéje is képes ellátni funkcióját.