In-line proteolitikus enzimreaktor kifejlesztése kapilláris elektroforézissel kapcsolt tömegspektrometriás vizsgálatokhoz
Dátum
Authors
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
DOI
Absztrakt
A fehérjék kvalitatív analízisének egyik legelterjedtebb módja a bottom-up módszer, mely során a vizsgált fehérjét peptidekre bontják specifikus proteáz enzimekkel. Az így kapott peptideket egymástól elválasztják (pl. kapilláris elektroforézissel (CE)), majd azokat tömegspektrometriásan detektálják. A fehérjék oldatfázisban történő enzimes emésztése sok időt vesz igénybe, mivel az enzim csak kis koncentrációban alkalmazható az önemésztés elkerülése érdekében. Emiatt gyakran alkalmaznak enzimek immobilizálásával létrehozott reaktorokat, amik nagyobb enzimkoncentráció alkalmazását és ezáltal jóval gyorsabb emésztést tesznek lehetővé. Munkám során CE kapilláris elején hoztunk létre immobilizált enzimreaktort tripszin adszorpciójával. Az így kialakított reaktor aktivitását befolyásoló tényezőket vizsgáltuk. A reaktoron a megállapított ideális paramétereket alkalmazva humán szérumalbumin in-line emésztését végeztük el (~7 perc reakcióidő). Ennek hatásfoka csak alig maradt el az oldatban (16 óra alatt) végzett emésztés hatásfokától.