Kv 1.3 ioncsatornát expresszáló stabil sejtvonal megalkotására alkalmas CRISPR-Cas9 kotranszfekciós rendszer létrehozásának előkészítése

Abstract

A szakdolgozat elkészítésekor a Kv1.3 ioncsatornát stabilan kifejező sejtvonal megalkotása volt a cél ehhez, a CRISPR-Cas9 kotranszfekciós rendszert szerettük volna alkalmazni. Ehhez az alábbi részfeladatok voltak szükségesek: a humán Kv1.3 csatornát kódoló KCNA3 gént tartalmazó plazmid szekvenálása, a KCNA3 gént tartalmazó plazmid amplifikálása bakteriális úton, a plazmid koncentrációjának és tisztaságának mérése, a plazmid kotranszfektálása CHO sejtekbe és a csatorna funkcionális expressziójának ellenőrzése elektrofiziológiai (patch-clamp) módszerrel, a csatornát jellemző biofizikai és farmakológiai tulajdonságok meghatározása.