Könnyminták fehérjetartalmának tripszines bontása mikrofluidikai enzimreaktoron

Abstract

Munkánk során egy olyan mikrofluidikai csipet dolgoztunk ki, mely alkalmas könnyminták fehérjetartalmának gyors és hatékony emésztésére. Szemben az oldatban való emésztéssel, mely 16 órát vesz igénybe, a kifejlesztett enzimreaktort alkalmazva a fehérjeemésztés reakcióideje ~ 1 perc. A vizsgálatokhoz 10 μl térfogatú mintákat használva a teljes folyamat 35 percig tart, mely magába foglalja az immobilizálást (10 perc) és a nem megkötődött tripszin eltávolítását (10 perc) is. A reaktor kis mintatérfogatot igényel, így a korlátozott térfogatokban rendelkezésünkre álló könnyminták emésztése is megvalósítható. A tervezett mikrofluidikai csip nagy mintafeldolgozó képességgel rendelkezik, mivel a kialakítása révén egyszerre 8 minta emésztése is kivitelezhető. A kapott CZE peptidtérképek alapján nincs számottevő eltérés az oldatban, illetve a reaktoron történő emésztés hatékonysága között. Habár a PDMS felületén adszorbeált tripszin viszonylag gyorsan elveszti aktivitását (2 óra), a PDMS csipek eldobható tulajdonságukból fakadóan (a felsorolt előnyök figyelembe vételével), a reaktorral való emésztés vonzó alternatívája lehet az oldatban emésztésnek.