Pseudomonas putida F1 baktérium protoplasztálása, a protoplaszt tulajdonságainak vizsgálata

Abstract

Céljaimnak megfelelően az Escherichia coli protoplasztálásáról szóló protokollt módosítottam a Pseudomonas putida F1 életkörülményeinek megfelelően, a rázatás hőmérsékletét 37 °C-ról 28 °C-ra változtattam. A Pseudomonas putida F1 sejtfalán kívül található lipidréteg eltávolításához kezdetben 0,1 M, majd 0,4 M EDTA-t alkalmaztam. Ezzel a módosított protokollal sikeresen protoplasztáltam a Pseudomonas putida F1 baktériumot. A Pseudomonas putida F1 baktérium esetében megfigyelhető, hogy a protoplasztálás után kb. 12 órával a sejtfala visszanő. A 2-dezoxi-D-glükóz kompetitív inhibitorral 15 mg/ml koncentráció alkalmazása esetén ~50 %-ra növeltem a protoplasztok arányát a protoplasztálás elvégzése után kb. 12 órával. Gázkromatográfiás módszerrel meghatároztam a Pseudomonas putida F1 baktérium és protoplaszt lipid-összetételét. A baktérium és protoplaszt lipid komponensei megegyeznek, arányukban is hasonlóak. Infravörös spektroszkópiai módszerrel felvettem a baktérium és protoplaszt infravörös spektrumát, amelyek hasonlóak a szakirodalomban talált más Pseudomonas fajok spektrumaihoz. A baktériumot és protoplasztot alkotó vegyületek funkciós csoportjainak infraaktív rezgéseiből következtettem a jellemző funkciós csoportokra.