A retinoblasztoma fehérje (Rb), az Akt-kináz, Erk-kináz és a Bcl-2 fehérje foszforiláltsági állapotának vizsgálata akut myeloid leukémiás és mielodiszpláziás szindrómás betegekben
dc.contributor.advisor | Rejtő, László | |
dc.contributor.advisor | Márton, Adrienn | |
dc.contributor.author | Veres, Katalin Beáta | |
dc.contributor.department | DE--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézet | hu_HU |
dc.date.accessioned | 2014-05-05T07:14:23Z | |
dc.date.available | 2014-05-05T07:14:23Z | |
dc.date.created | 2014-05-02 | |
dc.date.issued | 2014-05-05T07:14:23Z | |
dc.description.abstract | Irodalmi adatok alapján ismert, hogy az akut myeloid leukémia (AML) kialakulásában elsődleges szerepe van különböző jelátviteli útvonalak aktiválódásának a sejtciklust és proliferációt szabályozó fehérjék -pl. Erk-kináz, retinoblasztóma (Rb) fehérje- által. Antiapoptotikus fehérjék -pl. Bcl-2- mennyiségének növekedése és proapoptotikus jelátviteli folyamatok gátlása -pl. Akt-kináz- szintén leukémiához vezethet. Ezen útvonalak szabályozásában kiemelkedő szerepe van a fehérjék protein kinázok és -foszfatázok által történő reverzibilis foszforilációjának. Az Akt-, Erk-kináz, Rb- és Bcl-2 fehérjék bizonyos oldalláncokon foszforilálva a sejtek túlélését segítik elő. Konstitutív aktivációjuk az AML-es betegekben rövidebb teljes túléléshez vezethet. Több munkacsoport eredménye alapján feltételezhető, hogy a fenti fehérjék foszforilációja már a mielodiszpláziás szindrómában (MDS) szenvedő betegek is jelen lehet. Az MDS-esek kb. 30%-a később AML-be transzformálódhatnak. Célkitűzésünk az volt, hogy a fent említett fehérjék foszforilációs szintjét megvizsgáljuk AML-es és MDS-es betegektől származó leukocytákban. Összesen 31 AML-es és 16 MDS-es beteget vizsgáltunk 9 egészséges kontrollhoz viszonyítva. A fehérvérsejteket vér- vagy csontvelői mintából izoláltuk sűrűség gradiens centrifugálással. Lízis pufferrel való feltárást követően a fehérje mennyiségeket fotometriás módszerrel határoztuk meg 590 nm-en. A fehérjék szétválasztása és foszforiláltsági állapotának tanulmányozása Western-blot analízissel történt foszfospecifikus antitestek segítségével. Belső kontroll fehérjeként a glicerin-aldehid-foszfát-dehidrogenázt (GAPDH) használtuk. Az előhívás kemilumineszcensen történt Fluorchem programmal. A fehérjéket standardhoz viszonyítva azonosítottuk tömegük alapján. Eredményeink alapján az AML-es betegek 30%-ban volt észlelhető Rb-fehérje foszforiláció, az Akt 20%-ban, az Erk közel 40%-ban volt foszforilált állapotban. Ezzel szemben az egészséges kontrollokban nem lehetett foszforilációt kimutatni. Bcl-2 foszforilációt nem tudtunk kimutatni, viszont 3 beteg esetén a negatív kontrollhoz képest emelkedett Bcl-2 szintet figyeltünk meg. Néhány betegnél több fehérje foszforilációját is megfigyeltük egy időben. A betegség lefolyása során újabb proteinek foszforilálódhatnak, illetve el is tűnhetnek, így előre jelezhetik a progressziót vagy a kedvezőbb kimenetelt. Az MDS betegek esetén 5 esetben volt Erk foszforiláció, 3 esetben volt Akt foszforiláció és 3 esetben volt Rb foszforiláció kimutatható. Bcl-2 foszforilációt itt sem tudtunk kimutatni. 5 Kísérleteink eredményeit a klinikummal összevetve új prognosztikai faktorokra derülhet fény, melynek segítségével meghatározható az a betegcsoport, akiknek kináz inhibitorokkal kiegészítve a standard citosztatikus kezelését kedvezően befolyásolhatjuk a túlélésüket. | hu_HU |
dc.description.corrector | gj | |
dc.description.course | Biotechnológia | hu_HU |
dc.description.degree | MSc/MA | hu_HU |
dc.format.extent | 48 | hu_HU |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2437/191100 | |
dc.language.iso | hu | hu_HU |
dc.subject | fehérje foszforiláció | hu_HU |
dc.subject | akut myeloid leukémia | hu_HU |
dc.subject | retinoblasztoma fehérje | |
dc.subject | Akt-kináz | |
dc.subject | Erk-kináz | |
dc.subject | Bcl-2 | |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Orvostudomány | hu_HU |
dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Orvostudomány::Belgyógyászat | hu_HU |
dc.title | A retinoblasztoma fehérje (Rb), az Akt-kináz, Erk-kináz és a Bcl-2 fehérje foszforiláltsági állapotának vizsgálata akut myeloid leukémiás és mielodiszpláziás szindrómás betegekben | hu_HU |