Törzsfejlesztés a Saccharomyces ’boulardii’ probiotikus élesztő kompetitív in-host vizsgálatára

Abstract

A diplomamunkám célja egy olyan S. ’boulardii’ törzs tervezése volt, amely konstitutívan termel egy szabad szemmel is látható színezettséget okozó, fluoreszcens színmarker proteint (mRFP). Az élesztőre optimalizált, plazmidon kódolt mRFP gént már transzformálták C. albicans-ba, mely eredményeképpen a telepek rózsaszínűvé váltak (Keppler-Ross és mtsai., 2008). A munka során a CRISPR/Cas9 rendszer segítségével terveztük integrálni a mRFP-t kódoló ORF-t a probiotikus élesztő genomjába. A Cas9 enzim komplexet képez a guide RNS-el, mely így specifikus kettős száltörést indukál a probiotikus élesztő Ty1 transzpozonjának δ-szekvenciáiban, majd homológ rekombinációval az mRFP gént kódoló repair DNS beépül a genom ezen szakaszaiba. Az így kapott törzs kontrollként való alkalmazása lehetővé teszi majd más, markert nem termelő élesztő törzsek és izolátumok relatív növekedésének meghatározását (kompetitív assay-ben), így ezt a fejlesztett törzset később alapkutatásban, és akár diagnosztikában is lehet alkalmazni.