Preparation of Dye-Antibody Conjugates For Studying The Plasma Membrane Distribution Of Cd1d Proteins In B Cells

A tétel rövid nézete
dc.contributor.advisorJenei, Attila
dc.contributor.advisorSzöllősi, János
dc.contributor.authorShrestha, Dilip
dc.contributor.authorvariantShrestha, Dilip
dc.contributor.departmentMolekuláris orvostudomány doktori iskolahu
dc.contributor.submitterdepDE--OEC--Általános Orvostudományi Kar -- DE--OEC--Általános Orvostudományi Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--OEC--Általános Orvostudományi Kar -- DE--OEC--Általános Orvostudományi Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar -- DE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.contributor.submitterdepDE--ATC--Mezőgazdaság- Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar --
dc.date.accessioned2014-01-07T13:31:24Z
dc.date.available2014-01-07T13:31:24Z
dc.date.created2013hu_HU
dc.date.defended2013-11-27
dc.description.abstractIn the first part of the thesis, we generated dye-antibody conjugates by three different strategies which are commonly employed in most research laboratories (amine, sulfhydryl and carbohydrate targeted approaches) so that it could be used for studying membrane protein dynamics. The goal was to obtain conjugates which retained the maximum antigen recognition features and that produced the highest fluorescence intensities. We found that only amine targeted approach could produce higher dye per antibody variants (>3) with a maximum yield of antibody conjugates. Sulfhydryl and carbohydrate targeted approaches are site-specific, however, they led to the generation of low amount of functional dye-antibody conjugates. Therefore, amine targeted approach is the best method of antibody conjugation in comparison with the other two approaches in totality. In the second part of the thesis, our goal was to unravel the topological features of a membrane protein termed cluster of differentiation 1d (CD1d). These proteins are involved in lipid-based antigen presentation. We wanted to demonstrate the relationship of CD1d with peptide antigen presenters i.e. major histocompatibility complex (MHC) proteins on the cell surface. We documented using fluorescent dye-antibody conjugates and biophysical tools that CD1d harbors a close relationship with MHC I, β2-microglobulin (β2m), MHC II and GM1 gangliosides on the plasma membrane of human B cells at resting state. Surprisingly, β2m dependent CD1d constituted only ~15% of the total membrane CD1d proteins. In addition, fluorescence resonance energy transfer (FRET) studies revealed only minimal effect of membrane cholesterol depletion on the association between CD1d and GM1 ganglioside on the cell surface. Instead, CD1d rich regions were highly sensitive to low concentration of Triton X-100. Therefore, CD1d is either located at the periphery of GM1 gangliosides or is enriched in low cholesterol containing detergent sensitive membrane regions of the plasma membrane which could be a distinct raft subtype. In summary, we generated dye-antibody conjugates which were suitable for studying the membrane distribution of CD1d proteins. Subsequently, we also demonstrated that an intricate relationship existed between CD1d, MHC, and lipid species on the surface of human B cells which might be immunologically relevant.hu_HU
dc.format.extent102hu_HU
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/2437/178023
dc.language.isoenhu_HU
dc.subjectDye-antibody conjugateshu_HU
dc.subjectMHChu_HU
dc.subjectCD1dhu_HU
dc.subjectFREThu_HU
dc.subjectGM1 gangliosideshu_HU
dc.subjectcholesterol depletionhu_HU
dc.subjectB cellshu_HU
dc.subject.disciplineElméleti orvostudományokhu
dc.subject.sciencefieldOrvostudományokhu
dc.titlePreparation of Dye-Antibody Conjugates For Studying The Plasma Membrane Distribution Of Cd1d Proteins In B Cellshu_HU
dc.title.translatedPreparation of Dye-Antibody Conjugates For Studying The Plasma Membrane Distribution Of Cd1d Proteins In B Cellshu_HU
Fájlok
Eredeti köteg (ORIGINAL bundle)
Megjelenítve 1 - 6 (Összesen 6)
Nincs kép
Név:
Dilip Shrestha_PhD Thesis.pdf
Méret:
7.3 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Dilip Shrestha_PhD Thesis - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
Dilip Shrestha_ Short-Thesis.pdf
Méret:
1 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Dilip Shrestha- Short Thesis - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
Dilip Shrestha_Invitation Letter.pdf
Méret:
159.6 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Dilip shrestha_Invitation Letter - Nem hozzáférhető
Letöltés
Nincs kép
Név:
Dilip Shrestha_Invitation Letter-t.pdf
Méret:
162 KB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Dilip shrestha_Invitation Letter
Letöltés
Nincs kép
Név:
Dilip_Shrestha_Dissertation.pdf
Méret:
7.41 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Dissertation
Letöltés
Nincs kép
Név:
Dilip_Shrestha__Short_Thesis.pdf
Méret:
1.11 MB
Formátum:
Adobe Portable Document Format
Leírás:
Short_thesis_english
Letöltés
Gyűjtemények
Molekuláris Orvostudomány Doktori Iskola