A Schizosacharomyces japonicus leu1 génjének klónozása és funkcionális komplementációs analízise
Absztrakt
A genetikai kutatások egyik közkedvelt modellszervezete az Sch. pombe, e fajban számos mutáns törzs és géntúltermelésre alkalmas DNS konstrukció áll rendelkezésünkre, ami viszont nem mondható el az Sch. japonicus-ról. Ezért a célom a Sch. japonicus egyik szelekcióra is alkalmas génjének, a leu1 génnek, illetve a gén és szegélyi szekvenciáinak a klónozása volt. A klónozott leu1 gént túltermelő vektorba építettük, majd egy leu1 mutáns Sch. pombe törzsbe transzformáltuk, azt vizsgáltuk, hogy vajon a Sch. japonicus és Sch. pombe leu1 génjei között elég nagyfokú-e a szekvencia azonosság ahhoz, hogy funkcionálisan is helyettesítsék egymást. Eredményeink azt mutatják, hogy a 84,4%-os szekvencia hasonlóság nem volt elegendő ahhoz, hogy a Sch. japonicus génje működjön a Sch. pombe-ban. A gén és szegélyi szekvenciáinak klónozása a későbbiekben a gén megszakítására és a kromoszómális gén homológ rekombinációval való lecserélésére adna lehetőséget, ami egy leu1 deléciós mutáns törzset eredményezhetne a Sch. japonicus-ban.