Gyógynövény-kivonatok hatása a SARS-CoV-2 koronavírus fő proteáz aktivitására in vitro
Absztrakt
A koronavírus betegség 19 (COVID-19) kórokozója, a súlyos akut légzőszervi szindróma koronavírus 2 (SARS-CoV-2) elterjedése világméretű járványt, több száz országban jelentős egészségügyi és gazdasági károkat okozott. A koronavírus vakcinák megjelenése ellenére még mindig rendkívül fontos a fertőzések kezelésében alkalmazható terápiás szerek vizsgálata. Jelenleg is korlátozottak a betegség kezelésére alkalmazható célzott antivirális terápiás lehetőségek, ezért indokolt további lehetséges gyógyszercélpontok vizsgálata. A természetes eredetű, növényi-alapú gyógyszerek kiváló lehetőséget jelentenek a fertőző betegségek kezelésére, mivel farmakológiailag aktív vegyületek rendkívül széles forrását jelentik. Munkánk során célul tűztük ki annak vizsgálatát, hogy különböző gyógynövényekből készült kivonatok milyen hatást gyakorolnak a SARS-CoV-2 fő proteáz (Mpro) aktivitására, egy rekombináns fehérje szubsztrát-alapú kísérletes rendszer felhasználásával. A vizsgálatunkhoz bakteriális expressziós rendszerben termeltetett és tisztított SARS-CoV-2 fő proteázt és rekombináns multidomén szubsztrátot (His6-MBP-hasítóhely-mEYFP) használtunk. A gyógynövények kiválasztásánál arra törekedtünk, hogy a térségre jellemző, széles körben használt, és esetenként ismert antivirális hatással bíró fajokat válasszunk. A kivonatok készítéséhez különböző kivonási stratégiákat alkalmaztunk. Vizsgálatainkat a kivonatok előszűrésével kezdtük, ahol viszonylag nagy koncentrációjú (0,5 mg/ml) gyógynövény-kivonatok gátlási hatékonyságát határoztuk meg. Vizsgálataink alapján az egyes gyógynövény-kivonatok rendkívül változatos gátlási hatékonysággal jellemezhetők, de az alkalmazott kivonási stratégiák között is jelentős eltéréseket tapasztaltunk. Az Mpro aktivitását legalább 90%-ban gátolni képes kivonatok esetében elvégeztük a dózis-hatás összefüggések vizsgálatát is. A vizsgált 50 kivonat közül 7 esetében állapítottuk meg, hogy alacsonyabb koncentrációban is képes jelentős mértékben gátolni a fő proteázt. Egy adott gyógynövényt kiválasztva megvizsgáltuk, hogy annak kivonata hogyan befolyásolja HEK293T sejtek életképességét. Tapasztalataink alapján az általunk használt koncentrációkban nem befolyásolta az életképességét az egyes kivonatok az alkalmazott modell sejtvonalra. Eredményeink alapját képezhetik azon vizsgálatoknak, melyek célja a kivonatokban jelen lévő és a SARS-CoV-2 fő proteázt hatékonyan gátolni képest molekulák azonosítása, valamint a kivonatok hatásának vizsgálata további sejtkultúrás vizsgálatokban.