AMPKα1 génspecifikus shRNS konstrukt létrehozása
Dátum
Authors
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
DOI
Absztrakt
Munkám során olyan vektor konstruktot hoztam létre, amely AMPKα1 specifikus, géncsendesítésre alkalmas oligonukleotidokat tartalmaz. Ehhez a pSuper plazmidot használtuk, mely egy olyan emlős expressziós vektor, amely az siRNS molekulák intracelluláris szintézisét teszi lehetővé. Az oligok tervezését a Serial Cloner szoftver segítségével végeztük, a génspecifikus szekvenciákat nyilvános adatbázisokból (Sigma) kerestük ki. Miután megterveztük az oligókat a ligálás következett mellyel létrehoztuk a rekombináns DNS-t.A kész plazmiddal kompetens DH5α sejteket transzformáltunk, majd szelektív táptalajon növesztettük őket. A pozitív klónokat EcoRI és HindIII kettős emésztéssel szűrtük. A kész konstruktot AMPKα1 gén csendesítéséhez fogjuk felhasználni MCF-7 emlőrák sejtekben.