Schizosaccharomyces octosporus feltételezett med31+/sep10+ homológ génjének klónozása és expresszálása Schizosaccharomyces pombe sep10- mutánsban
Dátum
Szerzők
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt
A Debreceni Egyetem Genetikai és Alkalmazott Mikrobiológiai tanszékének munkatársai több szeptációban sérült mutáns Sch. pombe törzset izoláltak, melyeket „sep”-eknek neveztek el. Később bebizonyosodott a sep10 génről, hogy a Saccharomyces cerevisiae MED31 génjével rokon, melynek fehérjeterméke a mediátor komplex egyik alegysége. Azt tűztük ki célul, hogy megkeressük a Sch. pombe Sep10-hez leghasonlóbb fehérjét kódoló gént a Sch. octosporus-ban, klónozzuk és expresszáljuk a Sch. pombe-vel sep10- mutánsba. A Sch. pombe genomjának teljes szekvenciája ismert már, illetve a Sch. octosporus genomjának szintén nagy része ismert, így a rendelkezésünkre álló adatbázisban nagy valószínűséggel találunk hasonlóságot. Ha sikerül azonosítani a gént, a DNS szekvenciájának felhasználásával specifikus PCR primereket tervezhetünk rájuk, melyek a megfelelő helyen restrikciós vágóhelyeket tartalmaznak, így klónozni tudjuk a felszaporított génszakaszt egy expressziós plazmidba. Maga a folyamat több lépésből tevődik össze először izolálnunk kell a genomi DNS-t, majd a plazmidot ami a klónozáshoz kell, a PCR-hez primereket tervezünk. Az eredmények pontossága érdekében mindig ellenőriznünk kell a kapott eredményeket. A mikroszkóp alatt ellenőriznünk kell a sejteket, hogy a kísérletnek megfelelőek-e, illetve a gélben végzett nukleinsav futtatásokat UV lámpa alatt ellenőrizzük és utána dolgozunk tovább.