KÜLÖNBÖZŐ GENERÁCIÓS HER2 SPECIFIKUS KIMÉRA ANTIGÉNRECEPTORRAL MÓDOSÍTOTT NK-92 SEJTVONALAK LÉTREHOZÁSA ÉS IN VITRO HATÉKONYSÁGÁNAK VIZSGÁLATA HER2-T EXPRESSZÁLÓ TUMORMODELLEKEN

Abstract

Az onkológia területén áttörést jelentett a beteg T sejtjeinek génmódosítása kiméra antigén receptorokkal (CAR). Ugyanakkor, a szinte kizárólagosan autológ alkalmazás és a terápiás készítmények komplikált gyártási folyamata jelentős korlátot állít a CAR-T sejtek széleskörű használata elé. A természetes ölősejtek (NK) alkalmazása áthidalhatja ez az akadályt. Jelen kutatásunkban különböző generációs HER2 specifikus CAR-okkal módosított NK sejtvonalakat állítottunk elő, majd vizsgáltuk in vitro hatékonyságukat HER2-t kifejező tumorsejtek ellen. Kísérleteinkben az NK-92 sejtvonalat retrovirális transzdukcióval módosítottuk kostimulációs endodomént nem tartalmazó (I. generációs), illetve CD28 és/vagy 41BB domént kifejező (II. és III. generációs) HER2 specifikus CAR-okkal. A transzdukció eredményeként létrejövő változatos CAR expressziójú NK-92 sejtvonalakból áramlási citometriás szortolással nagy tisztaságú, a szintetikus receptort 95%-ban kifejező αHER2.CAR; αHER2.CD28.CAR; αHER2.41BB.CAR és αHER2.CD28.41BB.CAR NK-92 sejtvonalakat állítottunk elő. Ezt követően klasszikus immunológiai módszerekkel vizsgáltuk a CAR NK-92 sejtek aktiválódását (IFNγ ELISA) és tumorellenes hatását (ölési esszé) immobilizált HER2 és HER2-t expresszáló MDA-HER2, JIMT-1 (emlőtumor), illetve N87 (gyomorrák) sejtvonalak jelenlétében. Kontroll targetként MDA-HER2, kontroll effektorként nem módosított NK-92 sejtvonalat használtuk. Megállapítottuk, hogy az immobilizált HER2 molekulák azonos mértékben aktiválták a különböző generációs HER2-CAR NK-92 sejteket, amit hasonló mennyiségű IFNγ szekréciója jelez. Ugyanakkor, a kokultúra kísérletekben a CD28 és 41BB kostimulációs endodoméneket együttesen kifejező III. generációs HER2-CAR-ok indukálták a legjelentősebb effektorhatást, amit szignifikánsan magasabb IFNγ szekréció és ölési hatékonyság jelzett minden vizsgált tumorsejtvonal ellenében. Kísérleteinkben sikeresen állítottunk elő HER2 specifikus CAR-t kifejező humán NK sejtvonalakat, amelyek felismerték és eliminálták a HER2-t kifejező tumorsejteket. Jelen eredményeinkre alapozva a jövőben szeretnénk összehasonlítani a HER2-CAR NK-92 sejtek hatékonyságát állatkísérletes modellben is.