Szerző szerinti böngészés "Katona, Frida"
Megjelenítve 1 - 2 (Összesen 2)
Találat egy oldalon
Rendezési lehetőségek
Tétel Korlátozottan hozzáférhető Multiplex PCR alkalmazása gazdasági állatfajok azonosításábanKatona, Frida; Czeglédi, Levente; Mezőgazdaság-, Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar; DE--Általános Orvostudományi Kar; Pecsenye, Katalin; Evolúciós Állattani és Humánbiológiai TanszékNapjainkban egyre nagyobb figyelmet kap a különböző állati eredetű hús- illetve tejtermékek kapcsán a gazdasági haszonállatok fajazonosítása. Erre a közelmúlt élelmiszerhamisítás botrányai is felhívják a figyelmet. Az elmúlt évtizedekben számos analitikai, biokémiai és molekuláris biológiai módszert fejlesztettek ki élelmiszerekből történő fajazonosításra. Eleinte fehérjeanalitikai vizsgáló módszereket illetve zsírsavösszetételt meghatározó metodikákat alkalmaztak. Napjainkban a DNS-alapú technikák terjedtek el egyszerűségük és költséghatékonyságuk miatt a fajazonosítások terén. Munkánk során célul tűztük ki egy olyan molekuláris biológiai módszer kifejlesztését, amely segítségével egyszerűen, és költséghatékonyan tudjuk beazonosítani az élelmiszereinkben megtalálható állatfajok DNS-ét. A PCR technikák egyik gyakran alkalmazott fajtája a multiplex PCR. Ezen technika során egy reakcióközegen belül több primerpárt alkalmazva lehetővé válik a felamplifikált DNS szekvencia szakaszok méret szerinti elválasztása agaróz gélen. Fajazonosítást 2 gazdasági állatcsoporton (baromfifajok és emlősök) belül végeztünk. A különböző fajok mitokondriális DNS szekvenciáira terveztünk különböző primerpárokat úgy, hogy univerzális reverz primereket jelöltünk ki, és ezekhez képest a forward primereket különböző helyekre terveztük a különböző fajok esetében. A primertervezés során vizsgáltuk a hairpin struktúrák, a dimer struktúrák –primer önmagával történő dimerizációja, más primerekkel való dimerizáció- kialakulásának valószínűségét. A tervezett primerpárok optimális tapadási hőmérsékleteit gradiens PCR segítségével határoztuk meg. Továbbá vizsgáltuk húsokból kivont DNS mintákon a házi tyúk DNS-ének a kimutatási határát, mely 2% volt pulykával és házi kacsával szemben. A módszer alkalmazhatóságát különböző kezeléseknek (fűszerezés, hőkezelés, sózás) alávetett húskészítményeken (virsli, párizsi, sonka) is teszteltük. Minden esetben fajspecifikus fragmenteket kaptunk. A munka során a körülmények optimalizálásával a kísérletbe bevont fajok közül 3-3 faj (házi tyúk, házi kacsa, pulyka) és (szarvasmarha, házi nyúl, ló) egyszerre történő azonosítását tudtuk kivitelezni.Tétel Korlátozottan hozzáférhető A növényi foszfoprotein foszfatázok működésének vizsgálata(2012-05-02T12:41:51Z) Katona, Frida; Farkas, Ilona; DE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai IntézetA protein foszfatáz 1 (PP1) fontos szerepet tölt be az állatok sejtciklusának szabályozásában, többek között a retinoblasztóma fehérjéket is defoszforilálja. Az Orvosi Vegytani Intézet és az MTA Szegedi Biológiai Központ együttműködésében végzett kísérletek előzetes eredményei szerint a rizs PP1 az egyszikűek sejtciklusának is fontos regulátora, defoszforilálja a retinoblasztóma-szerű fehérjéket. A növényi PP1 szubsztrátjainak azonosításához a rizs PP1 elleni antitestet kívánunk előállítani. Ebből a célból baktériumban termeltettünk rizs PP1 katalitikus alegységet. A rizsben található PP1 katalitikus alegységet kódoló Os01g0349400 gén cDNS-ét pET28a(+) plazmidba ligálva előállítottunk egy hexahisztidin-fúziós fehérje termeltetésére alkalmas bakteriális vektort. A vektor segítségével E. coli BLR sejtekben rekombináns fehérjét termeltettünk, amelynek SDS-PAGE segítségével meghatározott molekulatömege jól egyezett a számított molekulatömeggel, és a fúziós peptidszakaszra specifikus antitest segítségével Western blottal detektálható volt. Végezetül a termeltetett hexahisztidin-fúziós fehérjét nikkel-agaróz kromatográfiával csaknem homogén formában nyertük ki. Az eljárással antitest termeltetésére alkalmas, könnyen tisztítható rekombináns rizs PP1c-t tudunk előállítani.