Multiplex PCR alkalmazása gazdasági állatfajok azonosításában
Multiplex PCR alkalmazása gazdasági állatfajok azonosításában
Dátum
Szerzők
Katona, Frida
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt
Napjainkban egyre nagyobb figyelmet kap a különböző állati eredetű hús- illetve tejtermékek kapcsán a gazdasági haszonállatok fajazonosítása. Erre a közelmúlt élelmiszerhamisítás botrányai is felhívják a figyelmet. Az elmúlt évtizedekben számos analitikai, biokémiai és molekuláris biológiai módszert fejlesztettek ki élelmiszerekből történő fajazonosításra. Eleinte fehérjeanalitikai vizsgáló módszereket illetve zsírsavösszetételt meghatározó metodikákat alkalmaztak. Napjainkban a DNS-alapú technikák terjedtek el egyszerűségük és költséghatékonyságuk miatt a fajazonosítások terén.
Munkánk során célul tűztük ki egy olyan molekuláris biológiai módszer kifejlesztését, amely segítségével egyszerűen, és költséghatékonyan tudjuk beazonosítani az élelmiszereinkben megtalálható állatfajok DNS-ét. A PCR technikák egyik gyakran alkalmazott fajtája a multiplex PCR. Ezen technika során egy reakcióközegen belül több primerpárt alkalmazva lehetővé válik a felamplifikált DNS szekvencia szakaszok méret szerinti elválasztása agaróz gélen. Fajazonosítást 2 gazdasági állatcsoporton (baromfifajok és emlősök) belül végeztünk. A különböző fajok mitokondriális DNS szekvenciáira terveztünk különböző primerpárokat úgy, hogy univerzális reverz primereket jelöltünk ki, és ezekhez képest a forward primereket különböző helyekre terveztük a különböző fajok esetében. A primertervezés során vizsgáltuk a hairpin struktúrák, a dimer struktúrák –primer önmagával történő dimerizációja, más primerekkel való dimerizáció- kialakulásának valószínűségét. A tervezett primerpárok optimális tapadási hőmérsékleteit gradiens PCR segítségével határoztuk meg. Továbbá vizsgáltuk húsokból kivont DNS mintákon a házi tyúk DNS-ének a kimutatási határát, mely 2% volt pulykával és házi kacsával szemben. A módszer alkalmazhatóságát különböző kezeléseknek (fűszerezés, hőkezelés, sózás) alávetett húskészítményeken (virsli, párizsi, sonka) is teszteltük. Minden esetben fajspecifikus fragmenteket kaptunk.
A munka során a körülmények optimalizálásával a kísérletbe bevont fajok közül 3-3 faj (házi tyúk, házi kacsa, pulyka) és (szarvasmarha, házi nyúl, ló) egyszerre történő azonosítását tudtuk kivitelezni.
Leírás
Kulcsszavak
multiplex PCR, fajazonosítás, mitokondriális DNS, gazdasági haszonállatok