Édesburgonyából származó β-amiláz aktivitás mintázatát aromás kromofor csoporttal jelölt szubsztrát sorozaton vizsgáltuk. Szubsztrátjaink aglikonként aromás gyűrűt tartalmaznak, amely kedvező kötődésüket eredményezi az aktív centrumba. Lehetővé teszi páros tagszámú szubsztrátok esetében a redukáló és nem redukáló végi termékek megkülönböztetését. Korábbi eredményekkel szemben, azt találtuk, hogy egy glükóz egység lehasadásával a trimer szubsztrátból CNPG2 termék keletkezett páratlan tagszámú szubsztrátok esetében. Transzglikozilezést minden szubsztráton megfigyeltünk, kivéve a CNPG5 és annál rövidebbeknél. Spontán maltóz transzfert figyeltünk meg a hidrolízis reakciók kezdeti szakaszában, ahol a processzív hasítás lehetséges. A processzív hasítási módot igazoltunk. A lépések átlagos száma növekszik a szubsztrát lánchosszának növekedésével. 1H-NMR módszer segítségével igazoltuk, hogy az enzim a retenciós glikozidázok közé tartozik, mivel a szubsztrát láncon belüli β-glikozidos kötést hidrolizálja és termékként β-anomert szabadít fel. MALDI-TOF mérésekkel kimutattuk a hidrolízis során keletkező összes redukáló és nem redukáló végi terméket, szigorú nem redukáló végi specifitást igazoltunk. Az enzim több produktív enzim-szubsztrát komplex kialakítására képes oligomer szubsztrátokkal. Meghatároztuk a katalitikus hatékonyságot, amely a szubsztrát lánchosszának növekedésével növekszik. A hosszabb szubsztrátok preferáltabban kötődnek és nagyobb reakció készséget mutatnak. A számított pszeudo elsőrendű kinetikai konstansok hasonló értékeket és tendenciát mutatnak. Megállapítottuk, hogy 5 GlcNAc egység a szubsztrátban nem elég ahhoz, hogy az enzim összes alhelyét lefedje. A DspB alhely térképének pontos meghatározásához hosszabb szubsztrátok előállítása szükséges. Javaslatot tettünk az enzim pontosabb besorolására a különböző adatbázisokban.

We studied the action pattern of sweet potato β-amylase on a chromophore-labelled substrate series. Our substrates contain aromatic ring as chromophore aglycon which caused favourable binding to the active centre. It could be differentiate maltose released from the nonreducing end and maltoside from the reducing end of the even numbered oligomers. In contrast with earlier results, we found glucose cleavage from trimer substrate resulted in CNPG2 product in case of odd numbered substrates. Transglycosylation was observed on each substrate except CNPG5 and smaller. Spontaneous maltose transfer happened in the early stage of the hydrolysis reactions, where processive cleavage is possible. Processive cleavage mechanism was verified. The mean number of steps increased with the chain lenght of the substrate. We verified with 1H-NMR technique that the enzyme belongs to the retaining glycosidases hydrolysing β-glycosidic bond in the substrate chain and forming β-anomer product. Using MALDI-TOF MS measurements all the reducing and nonreducing end products were detected and strictly nonreducing end preference was verified. The enzyme forms more productive enzyme-substrate complex with oligomer substrates. Determined catalytic efficiencies increased with increasing DP of the substrates. Favourable binding and higher reaction rate were observed in case of longer substrates. The calculated pseudo first order kinetic constants show similar values and tendency. We concluded that five GlcNAc moieties in the substrate were not enough for the total subsite occupancy of the enzyme. Synthesis of longer substrates is planned for successful subsite mapping of DspB. We suggested the exact classification of the enzyme in different databases.