A TRAIL, (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand) sejthalál receptorokat aktiváló természetes ligand. Ez a fehérje a rákterápiában ígéretes eszköz lehet, ugyanis a legtöbb rákos sejtben szelektíven képes p53 független apoptózist indukálni. A TRAIL kötődése receptoraihoz (DR4 és DR5) un. halált indukáló jelátviteli komplex (DISC) felépülését indítja el. A DISC-ben a DR4/DR5 receptorhoz FADD (FAS Associated Death Domain) adapter fehérjén keresztül kaszpáz 8/10 proteolítikus enzimek kötődnek be és aktiválódnak. Ezek az iniciátor kaszpázok azután további fehérjék hasítása, aktiválása (DN-áz, végrehajtó kaszpáz) révén indítják be a sejt önpusztító gépezetét. A TRAIL DR4/5 receptorokon keresztül túlélési illetve gyulladásos folyamatokat aktiváló jelet is indíthat többek között az NF-kB (Nuclear Factor-kappa-B) aktiválása révén. NF-kB aktiváció a FADD, TRADD (TNF Receptor Associated Death Domain), TRAF2 (TNF Receptor Associated Factor 2), cIAP1/2 (Cellular inhibitor of apoptosis protein 1/2) illetve a RIP1 (Receptor interacting protein 1) fehérjék interakciójának eredményeként jön létre. Dr Szegezdi Éva (Apoptosis Research Center, National University of Ireland, Galway) laboratóriumában folytatott korábbi kísérletekben kimutatták, hogy egyes tumor sejtekben az NF-kB gátlása révén fokozható a TRAIL indukálta apoptózis érzékenység. Céljuk olyan inhibitorotokat találni, amelyek a TRADD–TRAF2 interakció szintjén gátolják TRAIL által közvetített NF-kB aktivációt, azonban nem befolyásolják a kaszpáz-8 közvetítette apoptótikus útvonalat. Munkám során a TRADD-TRAF2 fehérjék interakciójának in vitro vizsgálatához optimalizáltam AlphaScreen (PerkinElmer) technikára épülő módszert. Az AlphaScreen fluoreszcens emisszión alapuló módszer, ahol a mért jel erőssége a Donor és az Akceptor gyöngyök közelségével arányos. Ezek a gyöngyök Nikkel, Streptactin, Streptavidin, illetve antitest molekulákkal vannak konjugálva, amelyek képesek kötődni a rekombináns TRADD illetve TRAF2 fehérjék megfelelő „tag”-jeihez. Így a TRADD és TRAF2 fehérjék interakciója quantitatíve követhető. Kísérleteim során különböző jelölésekkel ellátott humán rekombináns TRADD és TRAF2 fehérjéket expresszáltattam baktériumokban és a kitisztított fehérjék segítségével optimalizáltam az AlphaScreen mérést.