A fluoreszcensen jelölt antitestek affinitásának és kvantumhatásfokának jelölési aránytól való függésének mérése

Dátum
Folyóirat címe
Folyóirat ISSN
Kötet címe (évfolyam száma)
Kiadó
Absztrakt

Számos biofizikai és sejtbiológiai módszer során alkalmazunk fluoreszcens festékkel jelölt antitesteket sejtfelszíni fehérjék vagy intracelluláris sejtalkotók megjelölésére. A jelölési arány (festék/protein (F/P) arány) a festékmolekuláknak csak az átlagos számát adja meg egy antitesten, ezért vannak antitestek melyek kevesebb, míg mások több festékmolekulát tartalmaznak. Azonban közvetett bizonyítékok arra utalnak, hogy a nagyobb jelölési aránnyal rendelkező antitesteknek kisebb az affinitása. Mivel a nem kötődött antitestek F/P-je nagyobb volt a jelölés utáni oldatban, mint a jelölés előtti oldatban, ez arra utal, hogy ha nagyobb az antitest F/P értéke, akkor kisebb az affinitása az antigénhez. Nagyobb jelölési arányú antitestek esetén a hatás szignifikánsabb volt. Azonban az F/P növelésével nem változott egyenes arányban az antitestek fluoreszcencia emissziója, ezért ha sok festék van egy antitesten, a kvantumhatékonyságuk csökken. Megállapítottukk, hogy a kisebb jelölési arányú antitesteknek jobb az affinitása. Következésképpen ezt a jelenséget figyelembe kell vennünk, amikor fluoreszcensen jelölt antitestet választunk a kísérleteinkhez, vagy amikor a fluoreszcencia intenzitásokat korrigáljuk a jelölési arányhoz.

Leírás
Kulcsszavak
antitest, affinitás, jelölési arány, kvantumhatásfok, fluoreszcencia
Forrás