Az értekezésben két bilógiailag aktív peptid hormon, nevezetesen a glukagon típusú peptid-1 (GLP-1) és a melanin koncentráló hormom (MCH) mérésére szolgáló radioimmunoassay (RIA) módszerek kifejlesztését, valamint elsődleges gyakorlati alkalmazásukkal kapott eredményeinket foglaltam össze. Mindkét peptid fontos szerepet tölt be a szervezet energiaháztartásának szabályozásában és miután intézetünk egyik fontos kutatási területe a táplálkozás, az elhízás, az inzulin reziszetncia, valamint a 2-es típusú cukorbetegség kialakulásának tanulmányozása, a magas színvonalú laborháttér biztosítása érdekében fontosnak tartottuk ezen új RIA eljárások kifejlesztését, hogy használatuk napi rutinszerű alkalmazása váljon elérhetővé. A módszerek kidolgozásához szükséges GLP-1 és MCH peptidek szintézise, valamint a nyulak immunizálásához szüksége immunogének előállítása (a peptidek BSA hordozó fehérjéhez történő kapcsolása) a Szegedi Tudományegyetem, Orvosi Vegytani Intézetében történt, prof. Dr. Tóth Gábor vezetése mellett. A RIA módszerek kifejlesztésének többi lépését: ellenanyagok termelése nyulak immunizálásával, az antiszérumok karakterizálása (titer, affinitás, specificitás), a 125I izotóppal jelölt RIA tracer előállítása (radioaktív jelölés, HPLC tisztítás), a RIA eljárások optimális működési körülményeinek beállítása, a módszerek analitikai jellemzőinek meghatározása, majd a beállított módszer gyakorlati alkalmazása (plazma GLP-1, valamint szöveti MCH szintek mérése), intézetünk izotóp laboratóriumában magunk végeztük. GLP-1 RIA módszerünk esetében a kalibrációs görbe D50 értéke 10 meghatározás alapján: 15,18 ± 2,02 fmol/ml. Az assay kimutatási határkoncentrációja GLP-1 peptidre: 0,4 fmol/ml. MCH RIA esetében a kalibrációs görbe D50 értéke: 11,93 ± 1,78 fmol/ml, az MCH-ra vonatkoztatott kimutatási határkoncentráció: 0,2 fmol/ml. A GLP-1 és MCH mérésére kidolgozott RIA módszereink nagy érzékenységűek és specifikusak a mérni kívánt hormonokra. Egyaránt felhasználhatók plazma és szöveti peptid koncentrációk meghatározására.

The thesis summarizes the development of two biologically active peptide hormones, namely glutamine-type peptide-1 (GLP-1) and melanin concentrating hormone (MCH), as well as the results of their primary practical application. Both peptides play an important role in controlling the energy balance of the body and after being an important research field in our institute for studying the development of nutrition, obesity, insulin resistance and type 2 diabetes so we have found it important to develop these new RIA processes to ensure a high level of laboratory background to make their daily routine use available. Synthesis of the GLP-1 and MCH peptides required for the development of the methods and the production of immunogens for the immunization of rabbits (linkage of the peptides to the BSA carrier protein) was carried out at the Institute of Medical Chemistry at the University of Szeged by Professor Gábor Tóth. The other steps of the development of RIA methods include the production of antibodies by immunization of rabbits, characterization of antiserum (titer, affinity, specificity), 125I isotope-labeled RIA tracer (radioactive labeling, HPLC purification), optimization of RIA processes and the practical application of the methods (plasma GLP-1 and measurement of tissue MCH levels) was performed in our institute's isotope laboratory. For our GLP-1 RIA method the calibration curve D50 value after 10 determinations: 15.18 ± 2.02 fmol/ml. The detection limit of the assay for the GLP-1 peptide was 0.4 fmol/ml. For MCH RIA the calibration curve D50 value is 11.93 ± 1.78 fmol/ml, the detection limit concentration for MCH is 0.2 fmol/ml. Our RIA methods for measuring GLP-1 and MCH are highly susceptible and specific for the hormones to be measured. Both can be used to determine plasma and tissue peptide concentrations.