Vizsgálataink fókuszába két olyan nagy mortalitású, gyakori repalszussal járó daganat LHRH peptid hormon alapú célzott terápiájának új lehetőségeit kívántuk feltérképezni, melyek eddig nem képezték meghatározó klinikai fázis vizsgálatok részét a vizsgált daganatok esetében. Kísérleti munkánk során igazoltuk a TCC hólyagkarcinómák és sejtvonalak LHRH-R és LHRH ligand expresszióját, mely negatív korrelációban áll a progressziót jelző tumor grádussal. A szövetmintákon végzett radioligand kompetíciós assay alapján az AN-152, vagy akár a Cetrorelix is alkalmasak lehetnek a jövőben LHRH alapú célzott terápiák TCC daganatokon végzett in vivo, vagy klinikai fázis vizsgálataiban való alkalmazásra. További munkánk során igazoltuk az OCM3 sejtvonal LHRH-R expresszióját, majd megvizsgáltuk, hogy az AEZS-108 in vitro kezelés a DOX indukálta sejtpusztuláson kívül milyen az apoptózist támogató jelátviteli folyamatokat indukál OCM3 sejteken és azok mennyiben térnek el az ekvivalens dózisú DOX kezelés esetében tapasztaltaktól. Vizsgálataink során elsősorban az angiogenezisben és a migrációban részt vevő gének expressziós változásait helyeztük fókuszba. Eredményeink alapján, az AEZS-108 a DOX indukálta toxikus hatáson kívül hatékonyabban képes a MASPIN tumorszupresszor indukciójára, mint a szabad DOX, de az expressziót önmagában az LHRH ligand nem képes indukálni. Továbbá, az AEZS-108 kezelés hatással van számos angiogén faktor, illetve több a migrációban részt vevő gén expressziójára is. Az uvealis melanoma angiogenezisét érintő vizsgálatinkat a tumor szövetminták daganat őssejt tartalma és a vaszkularizációjuk szabályozása közötti összefüggések vizsgálatával folytattuk. Először RT- PCR-el igazoltuk daganat őssejtek fokozott jelenlétét a tumormintákban a nestin, NGFR, SOX10, FZD6 és PROM1 őssejtmarkerek vizsgálatával. IHC vizsgálataink alapján végzett Spearman analízis szerint szignifikáns korreláció figylelhető meg a tumorminták FZD6 és VEGFA expressziója között. A statisztikai analízisek szerint sem a HIF-1A sem a VEGFA nem állt szignifikáns összefüggésben a betegek túlélésével.

In our study we aimed to support the development of targeted therapeutic strategies focusing on LHRH-R positive tumors with high mortality and recurrence rate. In our first study we demonstrated high rate of expression of LHRH-R and LHRH ligand in human specimens with TCC type of bladder cancers and in bladder cancer cell lines. The expression of LHRH-R showed negative correlation with TCC grade. Radioligand binding studies also showed the presence of specific LHRH-R- s and high binding affinity of LHRH analogs like AN-152 or Cetrorelix. In our further study we investigated the LHRH-R expression of UM cancers and the altered expression of regulatory factors related to angiogenesis and metastasis by in vitro treatments with AEZS-108 or equal dose of DOX. Our analysis revealed that AEZS-108 is a more potent inducer of MASPIN tumor suppressor than free DOX in OCM3 cells and free LHRH ligand is not able to induce its overexpression. Furthermore, the treatment with AEZS-108 altered the expression of many angiogenic factors e.g. VEGFA, VEGFB, HIF-1A ANGPT1, ANGPTL3 and of key regulators of migration e.g. CXCR4, ETS1 and SERPINE1. In the last part of our studies, we investigated the regulation of angiogenesis in uveal melanoma in correlation with the presence of cancer stem cells (CSCs). RT-PCR analysis showed high expression of CSC markers, particularly nestin, FZD6 and SOX10 and somewhat lower expression of NGFR and PROM1. The protein expression of FZD6, HIF-1A and VEGFA was further evaluated in 52 uveal melanoma specimens by IHC-TMA. We report for the first time that Spearman analysis showed a significant correlation between FZD6 and VEGFA expression in uveal melanoma. The observed correlation between FZD6 and VEGFA suggests the presence of CSCs in UM that are associated with the vascularization process. Surprisingly, statistical analysises showed no correlations between the overall survival and expression of HIF-1A or VEGFA, despite targeting angiogenesis, often be assumed to be a promising way to treat a densely vascularized UM tumors.