Új lehetőségek a valós idejű PCR alkalmazására a molekuláris diagnosztikában
| dc.contributor.advisor | Peták, István | |
| dc.contributor.author | Árvai, Kristóf | |
| dc.contributor.department | DE--TEK--Természettudományi és Technológiai Kar--Biológiai és Ökológiai Intézet | hu_HU |
| dc.date.accessioned | 2011-05-09T14:16:48Z | |
| dc.date.available | 2011-05-09T14:16:48Z | |
| dc.date.created | 2011 | |
| dc.date.issued | 2011-05-09T14:16:48Z | |
| dc.description.abstract | Kísérleteink célja az volt, hogy megvizsgáljuk a közelmúltban bemutatkozott génszkenneléses eljárás alkalmazhatóságát a laboratóriumunkba érkező klinikai beteg anyagokon, illetve vizsgálataink tárgyát képezte az is, hogy a módszer alkalmas-e a minták előszűrésére és ezáltal a diagnosztikus labor költséghatékonyabbá tételére. Kísérleteink másik célja az volt, hogy a várhatóan a következő években gyakorlati alkalmazásra kerülő EGFRvIII fehérjét célzó vakcinához molekuláris diagnosztikát fejlesszünk, mely alkalmazható lenne a jelenleg forgalomban lévő monoklonális antitest terápia kiegészítő diagnosztikájaként is. Kísérleteink az alábbi lépésekből álltak: 1. A klinikai partnerintézményekből kapott, sebészileg eltávolított és formalin-fixált paraffinba ágyazott mintákból DNS-t, illetve RNS-t izoláltunk. A kinyert nukleinsavak koncentrációit valamint tisztaságát az 1. és a 3. táblázat tartalmazza. 2. A kivont DNS-ből több lépcsős nested PCR-rel amplifikáltuk fel a K-Ras gén 2. exonját, melyet utána Sanger-szekvenálással vizsgáltunk, mutációk után kutatva. 3. A kivont DNS-ből real-time PCR-rel is megvizsgáltuk a K-Ras gén 2. exonját, az amplifikáció után a termék megolvasztásával génszkennelést végeztünk, szintén mutációkat keresve. A két módszerrel nyert eredményeket és azok összehasonlítását a 2. táblázat tartalmazza. 4. Vizsgálataink eredményeként elmondhatjuk, hogy a génszkennelés alkalmas módszer a minták előszűrésére, kellő pontossággal és megbízhatósággal mutatja ki a vad illetve mutáns allél jelenlétét a mintában, alkalmazásával a K-Ras gén 2. exonjának mutációanalízisén alapuló molekuláris diagnosztika jelentősen felgyorsítható és költséghatékonyabbá tehető. 5. A kivont RNS-ből többféle módon is szintetizáltunk cDNS-.t: gén specifikus primerpár, oligodT, random hexamer primerkeverékkel, illetve ezek különböző arányú kombinációjával. A háztartási kontrollgéneket minden esetben ki tudtuk mutatni, az EGFRvIII mutáns gén azonban csak gén specifikus primerpár felhasználásával volt detektálható. 6. Az irodalomban is elfogadott arányban sikeresen mutattuk ki a különösen malignus EGFRvIII mutációt a vizsgált klinikai mintákból, egy újonnan fejlesztett real-time PCR alapú diagnosztikus módszerrel. | hu_HU |
| dc.description.corrector | gj | |
| dc.description.course | Biológus | hu_HU |
| dc.description.degree | Msc | hu_HU |
| dc.format.extent | 48 | hu_HU |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2437/107474 | |
| dc.language.iso | hu | hu_HU |
| dc.subject | PCR diagnosztika | hu_HU |
| dc.subject | HRM szekvenálás | hu_HU |
| dc.subject | EGFR | hu_HU |
| dc.subject.dspace | DEENK Témalista::Biológiai tudományok | hu_HU |
| dc.title | Új lehetőségek a valós idejű PCR alkalmazására a molekuláris diagnosztikában | hu_HU |